H-D-Phe-Pip-Arg-pNA-Acetat

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Katalog-Nr.

HDPG-001

Beschreibung

H-D-Phe-Pip-Arg-pNA-Acetat ist ein chromogenes Peptidsubstrat, das nach dem N-terminalen Bereich der Fibrinogen-Aα-Kette modelliert ist, dem natürlichen Substrat von Thrombin.

Anwendungen

Chromogene Bestimmung des Antithrombin-Heparin-Kofaktors (AT-III) unter Verwendung von Thrombin.

Aussehen

Weißer bis gelber Feststoff

Produktübersicht

Dieses Substrat ist thrombinspezifisch und wird in einem AT‑III‑Assay eingesetzt, der auf einer chromogenen, spektrophotometrischen Detektion basiert. Der Assay wird als sensitiv, präzise und einfach durchzuführen beschrieben.

Form

Fest

CAS-Nr.

115388-96-0

Molekulargewicht

612,68

Reinheit

99,81 %

Spezifität

Thrombin

Lagerung

Dicht verschlossen lagern und vor Feuchtigkeit schützen.
Pulver: −80 °C für 2 Jahre; −20 °C für 1 Jahr.
In Lösungsmittel: −80 °C für 6 Monate; −20 °C für 1 Monat.

Zubereitungshinweise

Leitfaden für Volumina von Stammlösungen:
1 mM: 1 mg in 1,6322 mL; 5 mg in 8,1609 mL; 10 mg in 16,3217 mL.
5 mM: 1 mg in 0,3264 mL; 5 mg in 1,6322 mL; 10 mg in 3,2643 mL.
10 mM: 1 mg in 0,1632 mL; 5 mg in 0,8161 mL; 10 mg in 1,6322 mL.
Wählen Sie das Lösungsmittel gemäß den Löslichkeitsdaten aus. Portionieren (Aliquotieren) Sie hergestellte Lösungen, um wiederholte Einfrier-Auftau-Zyklen zu vermeiden. Wird Wasser für die Stammlösung verwendet, verdünnen Sie diese zur Arbeitslösung und sterilisieren Sie anschließend vor der Anwendung mittels 0,22‑µm-Filtration.

Funktion

Chromogenes Substrat für Thrombin zur AT-III-Bestimmung.

Synonyme

S-2238-Acetat

Targets

Thrombin

Molekularformel

C₂₉H₄₀N₈O₇

Löslichkeit

DMSO: 100 mg/mL (163,22 mM); Ultraschallbehandlung ist erforderlich. Hygroskopisches DMSO kann die Löslichkeit erheblich beeinflussen; verwenden Sie frisch geöffnetes DMSO.
H₂O: ≥ 100 mg/mL (163,22 mM); Sättigungsgrad unbekannt.

In vitro

Herstellung der Stammlösung:
1. 25 mg H-D-Phe-Pip-Arg-pNA-Acetat in 40 mL sterilem destilliertem Wasser lösen, um eine Stammlösung mit 1,0 mmol/L herzustellen.
2. Die Stammlösung aliquotieren und lichtgeschützt bei 4 °C lagern.

Herstellung der Arbeitslösung:
1. 7,5 mL der Stammlösung abmessen.
2. 1,0 mL Polybrene-Lösung (3 mg/mL) zugeben.
3. 1,5 mL steriles destilliertes Wasser zugeben.
4. Gründlich mischen, um eine Arbeitslösung mit 0,75 mM herzustellen.
5. Bei 4 °C lagern; die Arbeitslösung ist 1 Woche stabil.

AT-III-Assay:
1. 50 µL Prüfplasma mit 3,50 mL heparinhaltigem Puffer verdünnen.
2. 400 µL des verdünnten Plasmas überführen und bei 37 °C für 2–6 min vorinkubieren.
3. 100 µL Thrombinlösung (10 NIH U/mL) zugeben und gut mischen.
4. Nach exakt 30 s 300 µL der vorgewärmten Arbeitslösung zugeben und kräftig mischen.
5. Nach weiteren exakt 30 s 300 µL 50%ige Essigsäure zugeben, um die Reaktion sofort zu stoppen.
6. Den Reaktionsansatz bis zur Messung lichtgeschützt aufbewahren.
7. Die Absorption bei 405 nm messen.
8. Eine Standardkurve erstellen und die AT-III-Konzentration des Prüfplasmas berechnen.
9. Blindkontrollen: Normalplasma-Blindwert = 400 µL AT-III-Standardlösung (1,00 U/mL) + 300 µL 50%ige Essigsäure + 400 µL destilliertes Wasser; Prüfplasma-Blindwert = 400 µL verdünntes Prüfplasma + 300 µL 50%ige Essigsäure + 400 µL destilliertes Wasser.

In vivo

Bereiten Sie unter Anwendung einer In-vitro-Dissolutionsmethode eine klare Stammlösung vor und fügen Sie anschließend die Co-Lösungsmittel sequenziell hinzu. Bereiten Sie die In-vivo-Arbeitslösung frisch zu und verwenden Sie diese am selben Tag. Bei Auftreten von Ausfällungen oder Phasentrennung können Erwärmung und/oder Sonikation zur Unterstützung der Lösung eingesetzt werden.

Protokoll 1: 10 % DMSO + 40 % PEG300 + 5 % Tween-80 + 45 % NaCl-Lösung. Löslichkeit: ≥ 2,5 mg/mL (4,08 mM), klare Lösung. Für 1 mL: 100 µL einer 25,0 mg/mL DMSO-Stammlösung zu 400 µL PEG300 geben und mischen; 50 µL Tween-80 zugeben und mischen; anschließend 450 µL NaCl-Lösung bis auf 1 mL auffüllen. Herstellung der NaCl-Lösung: 0,9 g Natriumchlorid in ddH₂O lösen und auf 100 mL auffüllen.

Protokoll 2: 10 % DMSO + 90 % einer 20%igen SBE-β-CD in NaCl-Lösung. Löslichkeit: ≥ 2,5 mg/mL (4,08 mM), klare Lösung. Für 1 mL: 100 µL einer 25,0 mg/mL DMSO-Stammlösung zu 900 µL einer 20%igen SBE-β-CD in NaCl-Lösung geben und mischen. 20%ige SBE-β-CD in NaCl-Lösung herstellen, indem 2 g SBE-β-CD in 10 mL NaCl-Lösung gelöst werden; bei 4 °C bis zu 1 Woche lagern.

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Projektbeschreibung:

Nur für Forschungs- und Industriezwecke. Nicht für den persönlichen Gebrauch bestimmt. Bestimmte Produkte in Lebensmittelqualität eignen sich für die Formulierungsentwicklung in Lebensmitteln und verwandten Anwendungen.

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