Immobilisiertes TPCK-Trypsin auf G3m

NATE-1772

Trypsin hydrolysiert Proteine, Peptide, Amide und Ester spezifisch an den Carboxylgruppen der basischen Aminosäuren L-Arginin oder L-Lysin.
G3m: 25 µg Trypsin pro CR-Säule, immobilisiert auf Dextran.
260 ST-Einheiten immobilisiert pro CR-Säule.
Diese CR-Säule schneidet mindestens 50 µg Tubulin pro Anwendung.
Nr. 15 Lagerpuffer: 50 mM Tris/HCl bei pH 8.0
Nr. 67 Reaktionspuffer: 50 mM Phosphat bei pH 8.0 (Sörensen)
Nr. 68 Waschpuffer: 50 mM Phosphat bei pH 8.0, 1 M NaCl

Rinderpankreas

EC 3. 4. 21. 4

4 °C

α-Trypsin; β-Trypsin; Kokonase; Parenzyms; Parenzyml; Tryptar; Trypure; Pseudotrypsin; Tryptase; Tripcellim; Spermrezeptor-Hydrolase; Alpha-Trypsin; Beta-Trypsin; EC 3. 4. 21. 4; Trypsin

1. Verdünnen Sie die gelieferten Puffer (mindestens 2 ml jeweils) mit doppelt destilliertem Wasser.
Für 1 Anwendung benötigen Sie:
1 ml 10x Reaktionspuffer und 9 ml doppelt destilliertes Wasser
2 ml 5x Waschpuffer und 8 ml doppelt destilliertes Wasser
1 ml 10x Lagerpuffer und 9 ml doppelt destilliertes Wasser
Das Substrat sollte sich im Reaktionspuffer befinden.
2. Äquilibrieren Sie die CR-Säule mit 10 ml Reaktionspuffer.
Laden Sie in eine Spritze 10 ml Reaktionspuffer, lassen Sie den Reaktionspuffer durch die Säule durch Schwerkraft bis zum oberen Filter laufen. Falls der Puffer sehr langsam läuft, üben Sie Druck mit einer Spritze aus.
3. Laden Sie die Substratlösung in den Reaktionspuffer.
Kleine Volumina (< 70 µl): Drehen Sie die CR-Säule 5 Sekunden in einer Tischzentrifuge (2000 U/min sind ausreichend). Lassen Sie die Substratlösung in das Matrixmaterial eintreten.
Größere Volumina: Lassen Sie die Substratlösung durch die Säule laufen.
Durchflussrate: bis zu 70 µl/minute
Halten Sie das Substrat etwa 1 Minute bei Raumtemperatur in der Säule. Eine höhere Umwandlung wird erreicht, wenn das Substrat erneut auf die Säule aufgetragen oder länger inkubiert wird.
4. Eluieren Sie die Produktlösung.
Kleine Volumina (< 70 µl): Zentrifugieren Sie das Produkt aus der Säule.
Größere Volumina: Lassen Sie das Substrat durch die Säule laufen und zentrifugieren Sie die verbleibende Lösung aus der Matrix.
Hinweis: Moleküle < 700 Dalton müssen mit 7 ml Reaktionspuffer eluieren.
Es schadet den Säulen nicht, wenn sie trocken laufen.
5. Waschen Sie die Säule mit 10 ml Waschpuffer.
6. Äquilibrieren Sie die Säule mit 10 ml Lagerpuffer.
Lagern Sie die Säule bei 4°C.
Frieren Sie eine CR-Säule niemals ein!