Mit dem vorausschauenden Blick auf die Entwicklung in der Enzymindustrie ist Creative Enzymes stets eines der ersten Unternehmen, das die neuesten Technologien beherrscht. Die starke technische Präsenz im Bereich der Enzymaktivitätsmessung unterscheidet uns von anderen Dienstleistern. Unser Team ist um eine zentralisierte, moderne Forschungseinrichtung mit einem Wissenschaftlerteam umfassender Expertise aufgebaut. Wir haben zahlreiche zuverlässige Ansätze etabliert, um all Ihre Testanforderungen zu erfüllen. Microscale Thermophoresis (MST) ist eine neu entwickelte Technik zur Quantifizierung biomolekularer Interaktionen. Durch die Verwendung verschiedener Modellsysteme umfasst die Anwendung von MST die Bestimmung von Bindungsstöchiometrien und Bindungsmodi, die Analyse des Protein-Unfoldings und der Thermodynamik. Creative Enzymes nutzt die Anwendung hauptsächlich für Enzymkinetik und bietet exzellente Aktivitätsmessdienste mit MST an.

Das Phänomen der Thermophorese, das gerichtete Wandern von Molekülen durch einen Temperaturgradienten, wurde erstmals 1856 von Carl Ludwig beschrieben. Nach der Entwicklung wurde die Microscale Thermophoresis (MST) schnell zu einer revolutionären Methode zur Überwachung von Protein- und Kleinmolekül-Interaktionen. Sie ermöglicht die Quantifizierung biomolekularer Interaktionen durch die thermophoretische Detektion selbst kleinster Veränderungen in Konformation, Ladung und Größe eines Moleküls, wie sie durch ein Bindungsereignis induziert werden. Daher kann MST Ereignisse wie die Bindung von kleinen Molekülen an Proteine, Substrate an Enzyme oder Liganden an Liposomen nachweisen. Darüber hinaus bietet MST Vorteile gegenüber den gängigsten nicht-fluoreszenten Methoden wie der isothermen Titrationskalorimetrie (ITC) oder der Oberflächenplasmonenresonanz (SPR), da Oberflächenimmobilisierung und hoher Probenverbrauch vermieden werden. Zusätzlich kann MST praktisch in jedem Puffer durchgeführt werden, sogar in Plasma und Zelllysat. Jüngste technische Fortschritte ermöglichen es nun auch, die intrinsische Fluoreszenz von Tryptophan-haltigen Proteinen zur Verfolgung ihrer Thermophorese zu nutzen, wodurch ein neuartiger, vollständig markierungsfreier und immobilisierungsfreier Ansatz zur Untersuchung molekularer Interaktionen geboten wird.

In der biomedizinischen Forschung ist MST zu einer wichtigen Methode zur Bestimmung der Enzymaktivität geworden. Neben der hohen Genauigkeit der MST-Tests umfassen weitere Merkmale und Vorteile:

• Kleine Probenmengen

Im Gegensatz zu anderen Methoden der Enzymtestung können bei MST pM/nM-Konzentrationen verwendet werden und es wird nur ein kleines Volumen (<4ul) der Reaktionslösung benötigt.

• Zeit- und Kosteneffizienz

Die MST-Messung kann in kurzer Zeit durchgeführt werden. Da die getesteten Enzyme in verschiedenen Lösungen vorliegen können, ist eine Reinigung der Zielenzyme vor dem Test nicht notwendig, und die Testtemperatur kann künstlich eingestellt werden.

Es gibt bereits einige Beispiele, die zeigen, dass MST zur Analyse der Enzymkinetik verwendet werden kann.

Abbildung: Kinetik des enzymatischen Abbaus von DNA durch DNase I unter Verwendung verschiedener MST-basierter Ansätze. (A) Schematische Darstellung des Mg²⁺-abhängigen Abbaus von DNA durch DNase I. (B) Echtzeitmessung des DNA-Abbaus.

Es ist klar, dass die Genauigkeit der MST-Geräte der entscheidende Punkt im Experiment ist, deren Empfindlichkeit und Reproduzierbarkeit die Zuverlässigkeit der Ergebnisse bestimmen. Creative Enzymes führt Enzymtests auf den modernsten MST-Instrumenten durch, um höchste Genauigkeit zu gewährleisten. In Kombination mit der umfassenden Expertise in MST und der professionellen Durchführung bringt der Service große Zufriedenheit für die Kunden.

Creative Enzymes engagiert sich für die Verbesserung und Optimierung der Quantifizierung der Enzymaktivität durch den Einsatz fortschrittlicher Techniken und Instrumente. Wir sind mit Sicherheit die erste Wahl für die kosteneffizientesten MST-Assays. Gerne beantworten wir alle Ihre Fragen zu dieser Art von Test.

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