Dispase

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Einführungen

Dispase ist eine Protease, die Fibronectin, Kollagen IV und, in geringerem Maße, Kollagen I spaltet. Sie ist in einigen Bakterien vorhanden und kann aus Kulturfiltraten von Polymyxa isoliert werden. Sie kann extrahiert, gereinigt und für Forschungszwecke verwendet werden. Sie ist besonders nützlich zur Isolierung von embryonalen Epithelzellen und Mesenchym. Dispase II wird speziell verwendet, um Leucin-Phenylalanin-Bindungen zu spalten.

Eigenschaften

Dispase ist eine neutrale Protease, die eine unspezifische Metalloprotease ist, die zur Verdauung der extrazellulären Matrix aus verschiedenen Geweben oder Organen verwendet wird. Dispase kann auch für die Zellernte oder den Inokulationsübergang in der Zellkultur verwendet werden. Sie wird auch verwendet, um versehentliches Verklumpen von Zellen in der Suspensionzellkultur zu verhindern. Die häufig verwendeten Proteasen Trypsin, Kollagenase und Streptase sind alle Protein-Hydrolasen und werden verwendet, um Gewebe zu dispergieren und Zellen zu trennen, aber sie sind sehr schädlich für Zellen, destabilisieren Zellen in Kultur und führen sogar zu Mykoplasma-Kontamination. Dispase schädigt Zellmembranen nicht und führt keine Mykoplasmen oder tierischen Viren ein. Unterschiede in Temperatur, pH, Serumzusammensetzung usw. haben wenig Einfluss auf Dispase, deren Aktivität durch Verdünnung stark reduziert wird, was auch die anschließende Kultur erleichtert.

Enzymaktivitätsdefinition

1U ist die Menge an Enzym, die Folin-positive Aminosäuren oder Peptide freisetzt, die 1 μmol Tyrosin unter Prüfbedingungen für 1 min entsprechen. Dispase: ≥ 0,8 U/mg (37 Grad, unter Verwendung von Kasein als Substrat, pH 7,5).

Inhibitoren: EDTA, EGTA, Hg²⁺. Serum hemmt die Enzymaktivität nicht.

Vorteile

• Schnelle und effektive, aber sanfte Wirkung des Enzyms.
• Die Zellen können intakt bleiben, ohne die Zellmembran zu schädigen.
• Das Enzym ist bakteriellen Ursprungs und enthält keine Mykoplasmen oder tierische Viruskontamination.
• Stabil gegenüber Änderungen in Temperatur, pH und Serumzusammensetzung.
• Einfache Inaktivierung mit Chelatbildnern oder Verdünnung.

Anwendungen

• Dispase wird häufig verwendet, um adhärente Primärzellen in Kultur zu verdauen, da diese Behandlung sich als sanfter als die Trypsinverdauung herausstellt.
• Dispase kann Serin-Phenylalanin verdauen.
• Die intravitrealen Injektionen von Dispase können verwendet werden, um proliferative vitreoretinale Läsionen in verschiedenen Tieren zu modellieren.
• Dispase ist eine Klasse von neutralen Metalloprotein-Hydrolasen, die Zellen, die auf Matrigel-Substraten gewachsen sind, recyceln können. Darüber hinaus kann Dispase auch zur Gewebetrennung verwendet werden.