Endoproteinase Asp-N

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Endopeptidase

Endopeptidasen wirken hauptsächlich auf Peptidbindungen innerhalb von Protein-Polypeptidketten, um lange Proteinstränge in kurze Peptidfragmente abzubauen. Die Spezifität der Spaltstelle, die von diesem Protease benötigt wird, wird als Substratspezifität der Protease bezeichnet. Die Substratspezifität einer Protease kann verwendet werden, um gezielt Peptide mit einer spezifischen Struktur zu erhalten.

Endopeptidase

Endoproteinase Asp-N ist eine aspartische Protease, die spezifisch die Amino-Terminus von Asp hydrolysiert und vielversprechende Anwendungen in der Proteomik-Analyse hat. Endoproteinase Asp-N ist eine Zink-Metalloendopeptidase. Sie ist hochspezifisch und spaltet Peptidbindungen auf der N-terminalen Seite von aspartischen Säureresten und in geringerem Maße von glutamatischen Säureresten (E). Sie stammt von einem mutierten Stamm von Pseudomonas fragi und hat eine Molekularmasse von 27 kDa. In Anwesenheit von Zink zeigt sie eine optimale Aktivität in einem pH-Bereich von 4–9 und kann unter denaturierenden Bedingungen aktiv bleiben. Asp-N-Protease kann in Kombination mit anderen Proteasen, wie Trypsin, für eine verbesserte Proteindigestion verwendet werden. Massenspektrometrie-Grad Asp-N-Protease kann für Peptidabgleich, Proteinidentifikation, In-Lösung- und In-Gel-Digestion von Proteinen sowie Peptid-Massenfingerabdruck verwendet werden. Besuchen Sie die Enzymseite für weitere Produktinformationen.

Quelle

Diese Asp-N ist eine Massenspektrometrie (MS)-Grad Zink-Metalloproteinase, die von einem mutierten Stamm von Pseudomonas fragi abgeleitet ist und eine Spur von Zink für die Aktivität benötigt. Asp-N kann allein oder parallel mit Trypsin oder anderen Proteasen verwendet werden, um Proteindigeste für Peptidmapping und Proteinsequenzierung zu erzeugen. Asp-N-Protease ist sowohl für In-Lösung- als auch für In-Gel-Digestion-Workflows geeignet.

Eigenschaften

Die Endoproteinase Asp-N spaltet hauptsächlich an der Aminoseite von Asparaginsäureresten und von cysteinhaltigen Säureresten, die aus der Oxidation von Cysteinresten resultieren, und erzeugt eine begrenzte Anzahl von Peptidfragmenten. Eine Spaltung kann auch an glutamatischen Resten erfolgen; jedoch ist die Spaltungsrate an den Glutamylresten signifikant niedriger als die Spaltungsrate an den asparaginsäurehaltigen Resten. AspN kann effizient Protein in 2-20 Stunden bei 37°C verdauen. AspN bleibt unter denaturierenden Bedingungen wie 1M Harnstoff, 2M Guanidin·HCl, 0,1% SDS, 2% CHAPS und 10% Acetonitril aktiv mit optimaler Aktivität im pH-Bereich von 6-8. Dieses lyophilisierte Enzym hat eine Masse von 27 kDa und ist bei -20°C für 1 Jahr stabil.