Native Jackbohnen α (1-2,3,6)-Mannosidase

NATE-0438

α-Mannosidase ist eine saure Hydrolase, die in Pflanzenvakuolen lokalisiert ist und als an dem Umsatz von N-verknüpften Glykoproteinen beteiligt angesehen wird. Es wurde gezeigt, dass α-Mannosidase die Proliferation von B-Lymphozyten hemmt. α-Mannosidase aus Canavalia ensiformis ist ein Tretamer, das aus zwei Untereinheiten besteht, die jeweils zwei Komponenten mit 44 und 66 kDa enthalten.

Mannosidase, natürlich (Jackbohne)

Jackbohne

Eine sterilfiltrierte Lösung in 20 mM Tris-HCl, 20 mM NaCl, pH 7,5.

≥ 10 U/ml

~190 kDa Dalton.

Die kontaminierenden Glycosidase-Aktivitäten werden unter Verwendung von p-Nitrophenyl-Glycosid-Substraten bestimmt und werden gemeldet, wenn sie > 0,001 % der Enzymaktivität betragen.

Das Enzym hat eine breite Substratspezifität und spaltet α (1-2, 3 und 6)-verknüpfte Mannose-Reste von Oligosacchariden und Glykoproteinen. Das Enzym zeigt jedoch eine gewisse kinetische Präferenz für 1-2, 3>6-verknüpfte Reste. Durch die Verwendung von Enzymkonzentrationen von etwa 50 U/ml und verlängerten Inkubationszeiten (bis zu 18 Stunden) bei 37°C kann die vollständige Entfernung aller α-verknüpften Mannoseeinheiten aus komplexen hochmannosehaltigen Glykane erreicht werden, was zur Bildung des Kern-Trisaccharids Man β (1,4)-GlcNAc β (1,4)-GlcNAc als Endprodukt führt. Um die Glykan-Sequenzierungsstudien zu beschleunigen, kann die langsame Aktivität des Jackbohnenenzyms gegenüber α (1-6)-verknüpften Mannose-Resten überwunden werden, indem das Enzym in Kombination mit der Alpha-Mannosidase von Xanthomonas mannihotis verwendet wird, die die 1-6-Verknüpfungen schnell spaltet. Der Mechanismus des Enzyms wurde untersucht und es wurde gezeigt, dass es die glykosidische Bindung zwischen den beiden Kohlenhydrat-Resten spaltet und ein stabiles Enzym-Substrat-Intermediat bildet. Der enzymgebundene Mannose-Rest kann mit angemessener Effizienz auf andere Kohlenhydrat-Akzeptoren übertragen werden. Auf diese Weise kann das Enzym zur Synthese neuartiger mannosehaltiger Glykane mit einer definierten anomeren Konfiguration verwendet werden. Interessanterweise ist die Jackbohnen-Mannosidase ein Glykoprotein, das Strukturen vom hochmannosehaltigen Typ enthält. Offensichtlich sind diese Glykan-Seitenketten für das Enzym nicht zugänglich, da sie möglicherweise durch das Polypeptid vom katalytischen Zentrum abgeschirmt sind. Die Kohlenhydrat-Seitenketten sind für die ordnungsgemäße Protein-Faltung und die Aufrechterhaltung der katalytischen Aktivität erforderlich. Das Enzym benötigt Zn2+-Ionen für die Aktivität und optimale Stabilität, aber die Zugabe von Zn2+ zum Inkubationspuffer ist normalerweise nicht erforderlich.

pH 4,0-4,5

Das Enzym ist stabil bei 2-8°C und -20°C. Das Enzym ist unter pH 5,5 instabil, es sei denn, Zn2+-Ionen sind vorhanden. Es ist zwischen 6,0-8,5 für 17 Stunden bei 37°C stabil. Ag+ und Hg2+ sind potente Inhibitoren der Enzymaktivität.

Bei 2-8°C lagern. Mit Kühlpack für die Lieferung am nächsten Tag versendet.

α-Mannosidase; α-D-Mannosidase; p-Nitrophenyl-α-Mannosidase; α-D-Mannopyranosidase; 1,2-α-Mannosidase; 1,2-α-D-Mannosidase; Exo-α-Mannosidase; EC 3.2.1.24; 9025-42-7; Mannosidase