Mit fortschrittlichen Technologien und umfangreichem Wissen über Enzyme ist Creative Enzymes darauf spezialisiert, zuverlässige Enzymaktivitätsassays für sowohl konventionelle als auch einzigartige Forschungsbedürfnisse anzubieten. Unsere Testdienstleistungen sind bekannt für die hohe Qualität und schnelle Bearbeitungszeit, die von einer langen Liste von Experten und Wissenschaftlern unterstützt werden. Um verschiedene enzymatische Forschungen zu erleichtern, bietet Creative Enzymes eine Vielzahl von Ansätzen zur Messung der Enzymaktivität an, um unterschiedlichen Forschungsanforderungen gerecht zu werden. Neben den relativ gut verstandenen Methoden wie spektrophotometrischen und kolorimetrischen Assays hat Creative Enzymes neueste Technologien und modernste Instrumente eingeführt, um fortschrittlichere Messungen zu entwickeln. Als eine der genauesten Testmethoden wurde der kalorimetrische Assay in mehreren biologischen Bereichen eingesetzt. Wir präsentieren stolz den Enzymaktivitätsassay-Service unter Verwendung der isothermen Titrationskalorimetrie.

Isotherme Titrationskalorimetrie (ITC) wird heutzutage viel breiter eingesetzt als bei ihrer frühen Einführung in die Industrie vor zwei Jahrzehnten. Derzeit ist ITC eine gut etablierte Methode zur Bestimmung der Bindungsaffinitäten zu Enzymen. Das grundlegende Prinzip ist die direkte Messung der Enthalpieänderung für eine bimolekulare Bindungsinteraktion bei konstanter Temperatur. Diese Technik misst die über die Zeit freigesetzte oder absorbierte Wärme und ist daher eine universelle und bequeme Methodik zur Quantifizierung der Menge an reagierenden Molekülen, wie der Bindungsthermodynamik, sowie zur Messung der Reaktionsgeschwindigkeit.

Die universelle Natur der Technik spiegelt sich in der Vielzahl von Systemen wider, die bisher mit ITC untersucht wurden. Neueste Übersichten haben die Nützlichkeit der Technik bei der Untersuchung von Protein–Arzneimittel-, Arzneimittel–DNA-, Protein–DNA- und Protein–Kohlenhydrat-Interaktionen beschrieben. Darüber hinaus ist ITC in keiner Weise durch das Molekulargewicht des Liganden eingeschränkt. Im Vergleich zu anderen Aktivitätsanalysemethoden hat ITC seine Vorteile. Typischerweise arbeiten die häufig verwendeten spektrophotometrischen und fluoreszenztechnischen Assays, indem sie die Lichtabsorption oder Fluoreszenz von Substrat oder Produkt messen, um die Enzymaktivität zu bestimmen. Viele Substrate und Produkte sind jedoch nicht spektroskopisch aktiv. Bei gekoppelten Assays, die durch die Kopplung einer anderen Reaktion arbeiten und das Produkt der vorherigen Reaktion als Substrat der nachfolgenden verwenden, wird die Genauigkeit der Bestimmung durch die Einführung zusätzlicher Variablen verringert. In der Forschung zur Enzyminhibition durch kleine Liganden können traditionelle Methoden die Zuverlässigkeit beeinträchtigen, da die Absorption oder Fluoreszenz des kleinen Liganden selbst. Stopped-Flow-Techniken sind präzise, aber zeitaufwendig und teuer für die routinemäßige Analyse. Durch die Anwendung der intrinsischen Eigenschaft fast aller Chemikalien, dass Wärme freigesetzt oder absorbiert wird, erfordert ITC keine Modifikation oder Kennzeichnung des zu analysierenden Systems. Darüber hinaus ist diese Technik unkompliziert und schnell, benötigt nur geringe Materialmengen und kann in Lösung durchgeführt werden. ITC ist eine zuverlässige und schnelle Methode zur Charakterisierung enzymatischer Reaktionen, ohne dass eine Modifikation oder Kennzeichnung des Systems erforderlich ist.

Es gibt jedoch keine Ausnahme, dass jede Testmethode Einschränkungen hat. Ein gutes Signal-Rausch-Verhältnis wird nur erreicht, wenn die Reaktion mit einer Geschwindigkeit abläuft, die es dem System ermöglicht, genügend Wärme in der ITC-Zelle zu erzeugen, um die instrumentelle Nachweisgrenze zu überwinden. Dies wird normalerweise für Systeme mit k_cat höher als 1min^-1 erreicht. Angesichts der intrinsischen Unterschiede jedes enzymatischen Systems und der unterschiedlichen Wärme, die durch verschiedene Reaktionen erzeugt wird, können die optimalen Betriebsbedingungen im Voraus nicht quantifiziert werden. Während des Prozesses muss darauf geachtet werden, die experimentellen Bedingungen entsprechend dem zu analysierenden System auszuwählen. Die umfangreiche Erfahrung bei Creative Enzymes wird dazu beitragen, einen ordnungsgemäßen Analyseprozess in ITC-Assays zu etablieren. Darüber hinaus nutzt Creative Enzymes aufgrund der hohen Abhängigkeit von der Ausrüstung nur erstklassige Instrumente, um genaue Ergebnisse zu liefern.

Abbildung: Schematische Darstellung des isothermen Titrationskalorimeters zur Untersuchung enzymatischer Reaktionen.
Referenz: Luca Mazzei et al. J. Vis. Exp. 2014, (86), e51487.

Führend in der Verbesserung von Enzymaktivitätsassays hat Creative Enzymes es sich immer zum Ziel gesetzt, jedem Kunden zuverlässigere Tests anzubieten. Die Ergebnisse sind mit hervorragender Qualität und hoher Reproduzierbarkeit garantiert. Unsere ITC-Enzymassay-Dienstleistungen werden Ihre Forschung erheblich beschleunigen. Falls Sie technische Bedenken haben, kontaktieren Sie uns bitte für professionelle Unterstützung.

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