O-Glycanase von Streptococcus pneumoniae, rekombinant

Anfrage

Katalog-Nr.

NATE-0496

Abkürz.

O-Glycanase, rekombinant (Streptococcus pneumoniae)

Alias

O-Glykanase

Quelle

E. coli

Spezies

Streptococcus pneumoniae

Produktübersicht

Das Enzym wird mit Sulfhydryl-Reagenzien wie p-Chlorquecksilberbenzensulfonsäure und Übergangsmetallen wie Mn2+ oder Zn2+ inaktiviert. Das Enzym wird auch mit 1 mM EDTA gehemmt. In hochreiner Form adsorbiert O-Glycanase an Glasoberflächen und wird inaktiviert oder zeigt variable Aktivitäten. Assays mit gereinigten Substraten sollten in Polypropylengefäßen durchgeführt werden, und der Transfer der Enzymlösungen mit Glaspipetten sollte vermieden werden. Das gereinigte Enzym, wie formuliert, ist bei 2-8°C stabil, aber etwa 30% seiner Aktivität gehen bei einem einzigen Gefrier-Tau-Zyklus verloren. Die Enzymaktivität wird nicht signifikant beeinträchtigt, wenn das Material 24 Stunden bei Raumtemperatur gelagert wird. Der optimale Puffer für die Enzymaktivität mit dem Standardsubstrat ist 50 mM Natriumphosphat (pH 5,0). Wenn die Glycosidase-Behandlung bei suboptimalem pH-Wert aufgrund der Löslichkeit oder Aktivitätsanforderungen von Glykoproteinen durchgeführt wird, ist mit einer gewissen Verringerung der Enzymaktivität zu rechnen.

Form

Eine sterilfiltrierte Lösung in 20 mM Tris-HCl, 25 mM NaCl (pH 7,5)

Aktivität

> 12 U/mg

Molekulargewicht

~180 kDa Dalton

Reinheit

O-Glycanase ist frei von kontaminierender Endo- und Exoglycosidase-Aktivität. Nach der Inkubation des Enzyms mit 0,2 mg resorufin-markierter Casein für ~18 Stunden bei 37°C war keine Protease-Aktivität nach der von Twining beschriebenen Methode nachweisbar. Der Produktionsstamm wurde umfassend getestet und produziert keine nachweisbaren Glycosidasen.

Spezifität

O-Glycanase spaltet Gal β (1-3) GalNAc α als intakte Disaccharideinheit von Serin- oder Threonin-Resten von Glykoproteinen oder Glykopeptiden ab. Dieses Disaccharid ist die definierende strukturelle Komponente für Core 1 Typ O-verknüpfte Glykane. Die Spaltung der glykosidischen Bindung erfolgt zwischen dem GalNAc-Rest in der Alpha-Konfiguration und der Hydroxylgruppe der Aminosäure-Seitenkette des Polypeptids. Substitutionen des Disaccharidkerns mit Sialinsäure oder einer lactosaminischen Wiederholungseinheit aus Galactose-N-acetylglucosamin oder Fucose blockieren die Hydrolyse und verhindern die Freisetzung des Oligosaccharids aus dem Protein. Um die Core I-Typ-Struktur freizulegen, sodass sie anfällig für die Wirkung der O-Glycanase ist, müssen verlängerte Oligosaccharide zunächst mit Glykosidasen behandelt werden, wie Sialidase A/NANase III, oder zusätzlich mit einer Kombination aus β (1-4)-Galactosidase und β-N-Acetylhexosaminidase/Hexase I. Das Enzym hat keine Aktivität gegenüber einzelnen α-GlcNAc, die entweder an Protein oder Kohlenhydrat gebunden sind. Mit dem synthetischen Substratanalogon, Gal β (1-3) GalNAc-p-nitrophenyl-Glykosidase, wurde ein Km-Wert von ~200 μM erzielt. Interessanterweise ähnelt das Enzym anderen Glykohydrolasen und es wurde berichtet, dass es eine 'trans'-Glykosidase-Aktivität hat. Die Spaltung der Disaccharideinheit erfolgt durch die Bildung eines kovalenten Enzymzwischenprodukts. Das enzymgebundene Glykan kann an eine Reihe von hydroxylierten Akzeptormolekülen übertragen werden, anstatt mit Wasser verdrängt zu werden.

Optimaler pH-Wert

Optimum: pH 5,0 Bereich: pH 5,0-6,0

Lagerung

Versendet in einer Kühleinheit für die Lieferung am nächsten Tag. Bei 2-8°C lagern. NICHT EINFRIEREN.

Puffer

5x Reaktionspuffer 5.0 (250 mM Natriumphosphat, pH 5.0)

Synonyme

O-Glykanase

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