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Messung der Enzymaktivität von Oxidoreduktasen mittels spektrophotometrischer Assays

Oxidoreduktasen sind eine Klasse von Enzymen, die den Transfer von Elektronen von einem Molekül auf ein anderes katalysieren. Das Molekül, das die Elektronen abgibt, wird als Elektronendonor oder Reduktionsmittel bezeichnet, und das Molekül, das die Elektronen aufnimmt, wird als Elektronenakzeptor oder Oxidationsmittel bezeichnet. Oxidoreduktase-Enzyme spielen eine wichtige Rolle im Stoffwechsel. Sie kommen sowohl in aeroben als auch in anaeroben Stoffwechselwegen vor, einschließlich Glykolyse, TCA-Zyklus, oxidativer Phosphorylierung und Aminosäurestoffwechsel. Um ihre Funktionen zu erfüllen, nutzen die Oxidoreduktase-Enzyme Redox-Cofaktoren. Zu den häufigen Redox-Cofaktoren gehören FAD (Flavin-Adenin-Dinukleotid), Fd (Ferredoxin), FMN (Flavin-Mononukleotid), NAD (Nicotinamid-Adenin-Dinukleotid), NADP (Nicotinamid-Adenin-Dinukleotid-Phosphat), Coenzym B, Coenzym Q usw. Zum Beispiel reduziert das Enzym Glycerinaldehyd-3-phosphat-Dehydrogenase NAD+ zu NADH in der Glykolyse. Während NADH im Weg der oxidativen Phosphorylierung wieder zu NAD+ oxidiert wird, um den richtigen Redox-Zustand der Zelle aufrechtzuerhalten. Pyruvat wird während der Glykolyse gebildet, das dann durch anaerobe Glykolyse unter Verwendung von NADH als Reduktionsmittel zu Laktat reduziert wird. Die Redox-Cofaktoren enthalten in ihrer Struktur ein oder mehrere aromatische oder ungesättigte zyklische chemische Gruppen. Dadurch absorbieren die Cofaktoren im reduzierten oder oxidierten Zustand, oder in beiden, stark UV- oder sichtbares Licht. Dies macht die Redox-Cofaktoren zu perfekten Reportern für spektrophotometrische Enzymtests. 

Oxidoreduktasen können in verschiedene Untertypen kategorisiert werden, darunter Oxidasen und Dehydrogenasen. Oxidase-Enzyme verwenden molekularen Sauerstoff als Akzeptor für Wasserstoff oder Elektronen. Im Gegensatz dazu übertragen Dehydrogenase-Enzyme Wasserstoff auf NAD, NADP oder ein Flavin, um ein Substrat zu oxidieren. Weitere Oxidoreduktasen sind Reduktasen, Peroxidasen, Hydroxylasen und Oxygenasen. Reduktasen können auch Oxidasen sein, da die meisten Redoxreaktionen reversibel sind. Die Richtung der Redoxreaktion hängt sowohl von der Thermodynamik als auch von der Kinetik ab. Peroxidasen katalysieren den Abbau von Wasserstoffperoxid, was ein natürlicher Abwehrmechanismus gegen Umweltangreifer ist. Hydroxylasen bauen Hydroxylgruppen in organische Verbindungen ein, während Oxygenasen Sauerstoff aus molekularem Sauerstoff in die Substrate einbauen.

Creative Enzymes bietet stolz spektrophotometrische Enzymtests zur Quantifizierung der Aktivitätsniveaus für alle Arten von Oxidoreduktase-Enzymen an:

Als eine große und wichtige Enzymfamilie werden Oxidoreduktasen in der pharmazeutischen Industrie weit verbreitet für die Synthese von Aminosäuren, Steroiden und anderen Molekülen eingesetzt; in der chemischen Industrie zur Herstellung von Spezialchemikalien; in der klinischen Diagnostik und anderen analytischen Anwendungen; sowie in weiteren Bereichen wie Materialmodifikation und Umweltschutz.

Enzyme Activity Measurement for Oxidoreductases Using Spectrophotometric Assays Abbildung: Die Struktur einer menschlichen Cytochrom P450-Reduktase (EC 1.6.2.4) mit den Cofaktoren NADPH (blau) und FAD (magenta) sowie einer prosthetischen Gruppe FMN (gelb).
Referenz: Jin, Y.; Chen, M.; Penning, T.; Miller, W. Biochem. J. 2015, 468 (1), 25.


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