Creative Enzymes hat seit mehreren Jahren den größten Marktanteil im Bereich der Enzymaktivitätsmessung. Wir verfügen über umfassende Fachkenntnisse und fortschrittliche Einrichtungen, um die beste Unterstützung für Ihre Forschung zu bieten. Die professionellen Testansätze und hochwertigen Tests haben den Bedarf von Tausenden von Wissenschaftlern gedeckt. Mit einer starken Präsenz in der Methodenentwicklung und Datenanalyse kann Creative Enzymes zuverlässige maßgeschneiderte Dienstleistungen mit schneller Bearbeitungszeit anbieten. Angesichts der steigenden Nachfrage nach radiometrischen Enzymassays hat Creative Enzymes standardisierte radiometrische Testdienste für die Enzymaktivität und Kinetik eingerichtet.

Im vergangenen Jahrzehnt haben die inhärente Empfindlichkeit, Spezifität und Einfachheit von radiometrischen Enzymassays zu einem raschen Anstieg ihrer Entwicklung und Anwendung in vielen Bereichen der Biochemie geführt. Radiometrische Enzymassays basieren auf der Umwandlung eines radioaktiven Substrats in ein radioaktives Produkt. Die Geschwindigkeit der enzymkatalysierten Reaktion wird bestimmt, indem die Radioaktivität entweder des Produkts oder des verbleibenden Substrats nach der Trennung von der Reaktionsmischung gemessen wird. Die Verfügbarkeit einer einfachen und schnellen Methode zur quantitativen Trennung von Substrat und Produkt ist eines der beiden Hauptanforderungen eines radiometrischen Enzymassays. Die andere Anforderung ist die Verfügbarkeit eines geeigneten markierten Substrats mit bekannter spezifischer Radioaktivität. Aufgrund der radiometrischen Enzymassays werden Substrate normalerweise bei niedrigen spezifischen Aktivitäten verwendet und können leicht genau bestimmt werden, daher ist die quantitative Trennung von markiertem Substrat und Produkten der Schwerpunkt der Enzymtests. Creative Enzymes hat umfangreiche Erfahrungen in der schnellen Extraktion und Trennung, was eine Garantie für genaue Ergebnisse ist.

Im Vergleich zu den meisten konventionellen Methoden wie kolorimetrischen oder spektrophotometrischen Verfahren haben radiometrische Assays viele Vorteile. Erstens leiden radiometrische Assays im Gegensatz zu diesen beiden Methoden nicht unter der Beeinflussung des Reaktionssolvents, wie z. B. von stark gefärbten Rohextrakten. Darüber hinaus ist es nur durch die Messung der radioaktiven Produkte möglich, die Enzymaktivität in Extrakten zu bestimmen, die hohe Konzentrationen des Produkts enthalten. Darüber hinaus ermöglicht die Empfindlichkeit der radiometrischen Assays deren Verwendung über einen breiteren Bereich von Substratkonzentrationen. Basierend auf den katalysierten chemischen Reaktionstypen werden Enzyme in sechs Klassen unterteilt. Radiometrische Aktivitätsassays können in jeder Klasse eingesetzt werden.

• Oxidoreduktasen

Konventionelle spektroskopische Assays sind für diese Gruppe von Enzymen gut untersucht, da die meisten von ihnen die großen spektralen Verschiebungen von Coenzymen wie NAD, NADP, FAD und FMN nutzen. Um jedoch die unzureichende Empfindlichkeit und die Beeinflussung durch kontaminierende Enzyme und endogene Materialien zu vermeiden, wurden radiometrische Methoden an deren Stelle verwendet. Außerdem wurden einige Reaktionen nur mit Rohextrakten untersucht, und ihre Cofaktor- und Wasserstoffdonator- oder -akzeptoranforderungen sind noch nicht bekannt. In diesen Situationen scheinen radiometrische Testmethoden die einzige Möglichkeit zu sein.

• Transferasen

Dies ist die große Klasse von Enzymen, und radiometrische Methoden wurden umfassend in den Assays eingesetzt. Zum Beispiel können für Methyltransferasen S-Adenosylmethionin, das im Methylgruppe mit ¹⁴C oder Tritium markiert ist, als Methylspender für radiometrische Assays verwendet werden. Für Enzyme, die Acylgruppen übertragen, können acyl-markierte Acyl-CoAs als Substrat verwendet werden.

• Hydrolasen

In der Vergangenheit wurden diese Enzyme hauptsächlich durch Schätzung der gebildeten Säure, durch pH-Titration oder durch Messung der CO₂-Freisetzung aus Bicarbonatpuffern getestet. Allerdings wurden eine große Anzahl von radiometrischen Assays beschrieben, da diese schneller, einfacher, genauer und empfindlicher sind als die konventionellen Assays.

• Lyasen

Radiometrische Assays werden häufig für Decarboxylasen-Tests verwendet. Die Freisetzung von ¹⁴CO₂ aus carboxyl-markierten Substraten ist die offensichtliche und am häufigsten verwendete Technik.

• Isomerasen

Obwohl radiometrische Methoden nur gelegentlich für die Analyse dieser Enzymklasse angewendet wurden, haben sie sich als viel empfindlicher und einfacher als die konventionellen Techniken erwiesen.

• Ligasen

Radiometrische Assays werden häufig in der Aktivitätsprüfung von Ligasen verwendet. Zum Beispiel katalysieren die Aminoacyl-tRNA-Synthetasen die ATP-abhängige Bildung von Aminoacyl-tRNA aus Aminosäuren und spezifischen Akzeptor-Transfer-Ribonukleinsäuren. Diese Enzyme sind hochspezifisch, jedes Enzym ist spezifisch für nur eine natürliche Aminosäure. Sie wurden fast ausschließlich mit radiometrischen Methoden getestet.

Abbildung: Die von Cholinacetyltransferase katalysierte Reaktion unter Verwendung von ¹⁴C-markiertem Acetyl-CoA als Substrat, ein Beispiel für einen radiometrischen Assay.

Trotz mehrerer Herausforderungen, die mit spezifischen Operationen verbunden sind, sind radiometrische Assays zu wichtigen Ansätzen in vielen Bereichen geworden. Es kann sicher vorhergesagt werden, dass sich diese Methoden als zunehmend nützlich erweisen werden, nicht nur in der allgemeinen Biochemie, sondern auch in der klinischen Biochemie, insbesondere in der Untersuchung und Diagnose von Krankheiten, die durch erbliche Enzymdefekte verursacht werden. Creative Enzymes hat immer ein scharfes Auge auf die Enzymdienstleistungsbranche und verfolgt eng die fortschrittlichen Techniken und dringenden Anforderungen. Unsere radiometrischen Enzymassays genießen die beste Qualität ihrer Klasse und eine schnelle Bearbeitungszeit. Bitte kontaktieren Sie uns für technische Unterstützung und Serviceanfragen.

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