Creative Enzymes hat seit mehreren Jahren den größten Marktanteil im Bereich der Enzymaktivitätsmessung. Wir verfügen über umfassende Fachkenntnisse und fortschrittliche Einrichtungen, um die bestmögliche Unterstützung für Ihre Forschung zu bieten. Die professionellen Testverfahren und hochwertigen Analysen haben die Bedürfnisse von Tausenden von Wissenschaftlern erfüllt. Mit einer starken Präsenz in der Methodenentwicklung und Datenanalyse kann Creative Enzymes zuverlässige, maßgeschneiderte Dienstleistungen mit schneller Bearbeitungszeit anbieten. Angesichts der steigenden Nachfrage nach radiometrischen Enzymtests hat Creative Enzymes standardisierte radiometrische Testdienstleistungen für Enzymaktivität und Kinetik etabliert.

Im vergangenen Jahrzehnt haben die inhärente Sensitivität, Spezifität und Einfachheit radiometrischer Enzymtests zu einer raschen Zunahme ihrer Entwicklung und Anwendung in vielen Bereichen der Biochemie geführt. Radiometrische Enzymtests basieren auf der Umwandlung eines radioaktiven Substrats in ein radioaktives Produkt. Die Geschwindigkeit der enzymkatalysierten Reaktion wird durch Messung der Radioaktivität entweder des Produkts oder des verbleibenden Substrats nach der Trennung aus dem Reaktionsgemisch bestimmt. Die Verfügbarkeit einer einfachen und schnellen Methode zur quantitativen Trennung von Substrat und Produkt ist eine der beiden Hauptanforderungen eines radiometrischen Enzymtests. Die andere Voraussetzung ist die Verfügbarkeit eines geeigneten markierten Substrats mit bekannter spezifischer Radioaktivität. Da die Substrate radiometrischer Enzymtests normalerweise bei niedrigen spezifischen Aktivitäten verwendet werden und leicht genau bestimmt werden können, ist die quantitative Trennung von markiertem Substrat und Produkten der entscheidende Punkt der Enzymprüfung. Creative Enzymes verfügt über umfangreiche Erfahrungen in der schnellen Extraktion und Trennung, was eine Garantie für genaue Ergebnisse ist.

Im Vergleich zu den gängigsten Methoden wie kolorimetrischen oder spektrophotometrischen Verfahren bieten radiometrische Tests viele Vorteile. Erstens leiden radiometrische Tests im Gegensatz zu diesen beiden Methoden nicht unter Störungen durch das Reaktionslösungsmittel, wie z. B. stark gefärbte Roh-Extrakte. Außerdem kann durch die ausschließliche Messung der radioaktiven Produkte die Enzymaktivität auch in Extrakten bestimmt werden, die hohe Konzentrationen des Produkts enthalten. Darüber hinaus ermöglicht die Sensitivität radiometrischer Tests deren Einsatz in einem breiteren Bereich von Substratkonzentrationen. Basierend auf den katalysierten chemischen Reaktionstypen werden Enzyme in sechs Klassen unterteilt. Radiometrische Aktivitätstests können in jeder Klasse eingesetzt werden.

• Oxidoreduktasen

Konventionelle spektroskopische Tests sind für diese Enzymgruppe gut untersucht, da die meisten von ihnen die großen spektralen Verschiebungen von Coenzymen wie NAD, NADP, FAD und FMN nutzen. Um jedoch unzureichende Sensitivität und Störungen durch verunreinigende Enzyme und endogene Stoffe zu vermeiden, werden stattdessen radiometrische Methoden eingesetzt. Außerdem wurden einige Reaktionen nur mit Roh-Extrakten untersucht, und ihre Cofaktor- sowie Wasserstoffdonor- oder -akzeptor-Anforderungen sind noch nicht bekannt. In diesen Situationen scheinen radiometrische Testmethoden die einzige Möglichkeit zu sein.

• Transferasen

Dies ist die größte Enzymklasse und radiometrische Methoden werden in den Tests umfangreich eingesetzt. Zum Beispiel kann bei Methyltransferasen S-Adenosylmethionin, das in der Methylgruppe mit ¹⁴C oder Tritium markiert ist, als Methylspender für radiometrische Tests verwendet werden. Für Enzyme, die Acylgruppen übertragen, können acyl-markierte Acyl-CoAs als Substrat verwendet werden.

• Hydrolasen

In der Vergangenheit wurden diese Enzyme hauptsächlich durch Schätzung der gebildeten Säure mittels pH-Titration oder durch Messung der CO₂-Freisetzung aus Bicarbonatpuffern getestet. Es wurden jedoch zahlreiche radiometrische Tests beschrieben, da diese schneller, einfacher, genauer und empfindlicher sind als die herkömmlichen Tests.

• Lyasen

Radiometrische Tests werden häufig für Decarboxylase-Tests verwendet. Die Freisetzung von ¹⁴CO₂ aus carboxyl-markierten Substraten ist die offensichtliche und am häufigsten verwendete Technik.

• Isomerasen

Obwohl radiometrische Methoden nur gelegentlich für die Tests dieser Enzymklasse angewendet wurden, haben sie sich als wesentlich empfindlicher und einfacher als die herkömmlichen Techniken erwiesen.

• Ligasen

Radiometrische Tests werden häufig bei der Aktivitätsbestimmung von Ligasen eingesetzt. Zum Beispiel die Aminoacyl-tRNA-Synthasen, die die ATP-abhängige Bildung von Aminoacyl-tRNA aus Aminosäuren und spezifischen Akzeptor-Transfer-Ribonukleinsäuren katalysieren. Diese Enzyme sind hochspezifisch, wobei jedes Enzym nur für eine natürliche Aminosäure spezifisch ist. Sie wurden fast ausschließlich mit radiometrischen Methoden getestet.

Abbildung: Die von Cholinacetyltransferase katalysierte Reaktion unter Verwendung von ¹⁴C-markiertem Acetyl-CoA als Substrat, ein Beispiel für einen radiometrischen Test.

Trotz einiger Herausforderungen, die mit bestimmten Abläufen verbunden sind, haben sich radiometrische Tests in vielen Bereichen zu wichtigen Methoden entwickelt. Es kann mit Sicherheit vorhergesagt werden, dass diese Methoden zunehmend nützlich sein werden, nicht nur in der allgemeinen Biochemie, sondern auch in der klinischen Biochemie, insbesondere bei der Untersuchung und Diagnose von Krankheiten, die durch vererbte Enzymdefekte verursacht werden. Creative Enzymes hat stets einen scharfen Blick für die Enzymdienstleistungsbranche und verfolgt die neuesten Techniken und dringenden Anforderungen genau. Unsere radiometrischen Enzymtests bieten erstklassige Qualität und schnelle Bearbeitungszeiten. Bitte kontaktieren Sie uns für technischen Support und Serviceanfragen.

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