Enzymatische Konjugation mit Proteinen/Peptiden

Enzym-Protein/Peptid-Konjugate oder quervernetzte Enzyme werden für verschiedene Anwendungen hergestellt. Ein typisches Beispiel ist die Konjugation von „aktiviertem“ Meerrettichperoxidase (HRP) an Zielantikörper, -protein oder -peptid in Immunoassays. Andererseits kann die Vernetzung von Enzymmolekülen als trägerfreie Immobilisierungstechnologie das industrielle Enzymarsenal erweitern, indem die Stabilität während der Anwendung und Lagerung erhöht wird. Die Konjugationsreaktion mit Proteinen oder Peptiden erfolgt normalerweise über kleine molekulare Verknüpfungen (z.B. Glutaraldehyd) oder Enzyme (z.B. Transglutaminase), auch bekannt als Vernetzungsverfahren.

In der Forschung und in Laborassays wird modifizierte Meerrettichperoxidase (HRP) umfassend in Immunoassay-Anwendungen eingesetzt, wo sie spontan mit Aminen an einem Antikörper (oder einem anderen Protein) konjugiert und ein nachweisbares Signal in Gegenwart eines Substrats erzeugt. Diese Anwendung kann als eine Art der Protein-/Peptidmarkierung betrachtet werden.

In der Industrie haben enzymatische Reaktionen zwar Vorteile wie hohe Selektivität und Effizienz, sie haben jedoch auch Nachteile, wie das Fehlen von Betriebs- und Lagerstabilität. Daher werden quervernetzte Enzyme, die typischerweise durch Mischen einer wässrigen Lösung des Enzyms mit einer wässrigen Lösung von Glutaraldehyd hergestellt werden, angewendet, um die Enzyme mit hoher Produktivität zu verbessern und die Kosten eines Trägers zu vermeiden. Diese Anwendung ist auch als eine Art der Enzymimmobilisierung bekannt.

Creative Enzymes bietet modifizierte Meerrettichperoxidase (HRP), alkalische Phosphatase (AP) und andere instrumentelle Enzyme für eine einfache Konjugation mit Proteinen und Peptiden für verschiedene Immunoassays und verwandte Anwendungen an. Wir haben auch umfangreiche Erfahrung in der Entwicklung von CLEAs zur Verbesserung der Eigenschaften von Enzymen. Wir bieten Dienstleistungen zur Analyse der Strukturen von Enzymkomplexen nach Konjugation und Reinigung an. Einige hervorgehobene Dienstleistungen umfassen:

• Entwicklung von Immunoassays.
• Vorbereitung von quervernetzten Enzymaggregaten (CLEAs).
• Identifizierung von Strukturen der Proteinvernetzung.
• Charakterisierung von Enzymkonjugaten.

Zugehörige Abschnitte

Enzymtechnik und -modifikation

Abbildung 1 Eine schematische Darstellung der CLEA-Vorbereitung.
(Angewandte Mikrobiologie und Biotechnologie 2011)