E. coli Enzym-Expressionssystem

Creative Enzymes ist ein Unternehmen der industriellen Biotechnologie, das maßgeschneiderte Dienstleistungen für die Expression rekombinanter Enzyme in mehreren Systemen bereitstellt und optimiert. Wir haben verschiedene Wirtsysteme getestet und über Jahre hinweg umfangreiche Erfahrungen gesammelt. Das Wissen über verschiedene Expressionswirte ermöglicht eine fallbezogene Expression für jedes Enzym, wobei der Expressionsvektor und der Wirtsstamm aus unserer vielseitigen Sammlung ausgewählt werden, um die höchste Ausbeute zu einem akzeptablen Kostenlevel zu erzielen. Verschiedene Reinigungstags sind ebenfalls in Expressionskonstrukten verfügbar, wenn erforderlich. Creative Enzymes ist mit den modernsten Betriebsanlagen ausgestattet, und das Expertenteam kann die nachgelagerten Prozesse und die Reinigung verfolgen.

Escherichia coli ist der am häufigsten verwendete Organismus zur Produktion rekombinanter Enzyme, die sowohl für Laboruntersuchungen als auch für die erste Entwicklung in kommerziellen Aktivitäten dienen, da er einfach, schnell und kostengünstig zu kultivieren ist. Darüber hinaus sind seine Vektorsysteme gut entwickelt. Daher ist es nicht überraschend, dass das E. coli Expressionssystem den größten Anteil aller Systeme in der industriellen und pharmazeutischen Proteinproduktion ausmacht. Als dominierendes bakterielles Expressionssystem dient es auch als nützlicher Maßstab für den Vergleich zwischen verschiedenen Expressionsplattformen. Das E. coli Expressionssystem ist die Grundlage für Bemühungen in der Enzymtechnik und der Hochdurchsatz-Strukturanalyse. Dieses System spielt auch eine Schlüsselrolle bei der funktionalen Expression von nicht-glykosylierten Proteinen. Weitere Vorteile der Verwendung des Systems sind, dass das Genom von E. coli schnell und präzise modifiziert werden kann, die Kontrolle des Promotors nicht schwierig ist und die Plasmidkopienzahl leicht verändert werden kann. Darüber hinaus spielt das E. coli System auch eine entscheidende Rolle bei der Veränderung des metabolischen Kohlenstoffflusses, der Vermeidung der Incorporation von Aminosäureanaloga, der Konfiguration intrazellulärer Disulfidbrücken und der reproduzierbaren Leistung mit Computersteuerung. E. coli kann rekombinante Proteine bis zu achtzig Prozent seines Trockenmassegewichts akkumulieren und überlebt verschiedene Umweltbedingungen, was es ideal für die Massenproduktion macht.

Das E. coli System hat jedoch auch einige Nachteile. Zum Beispiel kann die Bildung von Acetat bei hohen Zellzahlen zu Zelltoxizität führen. Dieser Zustand kann durch Kontrolle des Sauerstoffniveaus vermieden werden. Darüber hinaus sind Proteine, die als Einschlusskörper produziert werden, oft inaktiv, unlöslich und müssen umgefaltet werden. Außerdem sind die von diesem System produzierten Proteine mit vielen Disulfidbrücken extrem schwierig umzufalten. Ebenso ist das E. coli System normalerweise auf die Produktion von unglykosylierten Proteinen beschränkt. Ein Nachteil für die therapeutische Verwendung der produzierten rekombinanten Enzyme in E. coli ist die Ansammlung von Lipopolysaccharid (LPS), nämlich Endotoxinen, die pyrogen sind bei Menschen und anderen Säugetieren. Proteine für diese Anwendung müssen in einem zweiten Schritt gereinigt werden, um endotoxinfrei zu werden.

Daher hat Creative Enzymes mehrere Methoden entwickelt, um diese Nachteile des E. coli Systems zu überwinden, wie die Verwendung verschiedener Promotoren, die Verwendung verschiedener Wirtsstämme, die Co-Expression von Chaperonen oder Faltungshilfen, die Senkung der Temperatur und die Sekretion von Proteinen in den periplasmatischen Raum oder das Medium. Darüber hinaus kann das Problem der Acetatproduktion und Zelltoxizität behoben werden, indem Glukose exponentiell zugeführt wird und die spezifische Wachstumsrate unter dem Niveau gehalten wird, das zur Acetatproduktion führt. Für die meisten Serviceanfragen empfehlen wir das E. coli System als ersten Versuch aufgrund seiner niedrigen Kosten und robusten Fermentationsbedingungen. Im Allgemeinen bietet der E. coli Expressionsservice von Creative Enzymes eine kundenorientierte Lösung, um Forschern und Unternehmen zu helfen, ihre rekombinanten Enzyme erfolgreich zu produzieren. Insgesamt kann Creative Enzymes den Kunden eine schnelle und effiziente Enzymexpression und -produktion sowie vollständige maßgeschneiderte Dienstleistungen zur Herstellung eines einzigartigen Enzyms von Interesse bieten.