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Enzymatische Disulfidbindung Analyse

Disulfidbrücken sind eine häufige posttranslationalen Modifikation in Proteinen, die zwischen den Schwefelatomen von zwei Cystein (Cys)-Rückständen während der Biosynthese von Proteinen gebildet werden. Aufgrund ihrer weiten Verbreitung ist die Analyse von Disulfidbrücken oft entscheidend für die Entdeckung und Identifizierung von Enzymen.

Creative Enzymes ist ein Branchenführer in der Bestimmung und Analyse von Enzymstrukturen und bietet umfassende und effektive Lösungen für die Analyse von Enzym-Disulfidbrücken basierend auf unseren fortschrittlichen Technologieplattformen und Tests.

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Die Rolle der Disulfidbrücken bei Enzymen

Im Vergleich zu anderen Proteinen sind Disulfidbrücken besonders entscheidend für Enzyme bei der richtigen Faltung, und sie haben sowohl strukturelle als auch funktionale Rollen. Zum Beispiel können nicht-native Disulfidbrücken in Enzyme eingebaut werden, um deren Stabilität zu erhöhen. Außerdem sind einige Disulfidbrücken, die als allosterische Disulfide bekannt sind, verantwortlich für die effektiven biologischen Funktionen von Enzymen, und der Abbau solcher Brücken würde zu einer Veränderung der Proteinaktivität führen. Daher liefert die Analyse von Disulfidbrücken wichtige Informationen für die Forschung zu Protein-Stabilität, Struktur-Funktions-Beziehungen und allen disulfidvermittelten Isoformen von Enzymen.

Bedeutung der Analyse von Enzym-Disulfidbrücken

Disulfidbrücken-Tests bieten Forschern wichtige Werkzeuge und Mittel, um Einblicke in die Struktur und Funktion von Enzymen zu gewinnen. Wir engagieren uns für die Analyse von Disulfidbrücken und nutzen weiterhin eine Vielzahl von hochmodernen Techniken, um den Fortschritt der Disulfidbrückenforschung zu fördern. Indem wir die Eigenschaften und Mechanismen von Disulfidbrücken aufdecken, können wir Forschern helfen, die biologischen Funktionen von Enzymen besser zu verstehen und neue Richtungen und Strategien für das Studium verwandter Krankheiten und die Arzneimittelentwicklung bereitzustellen.

Analytische Techniken für Disulfidbrücken

Disulfidbrücken können hauptsächlich durch drei Klassen von Techniken analysiert werden, wie folgt.

  • Kristallographische Techniken, die hochauflösende dreidimensionale Strukturen erzeugen.
  • Algorithmische Techniken, die auf Sequenzdaten basieren.
  • Techniken, die experimentelle und algorithmische Methoden kombinieren, um ein Gemisch aus verdauten Peptiden zu analysieren.

Eine Vielzahl analytischer Techniken ist an einer typischen Studie beteiligt, wie z.B. NMR-Spektroskopie, Röntgenkristallographie, Edman-Abbau, diagonale Papier-Elektrophorese und Flüssigkeitschromatographie (LC) gekoppelt mit Massenspektrometrie (MS). Im Vergleich zu Einschränkungen bei anderen Methoden, wie hohen Reinheitsanforderungen an Proben und niedriger Durchsatz, ist die Bottom-up-MS die am häufigsten verwendete Methode zur Analyse von Disulfidbrücken. Im Allgemeinen umfasst dieser Bottom-up-Ansatz die Verdauung großer Biomoleküle in kleine Stücke, die leicht zu analysieren sind, mit Hilfe von Ionisierungstechniken, komplementären Fragmentierungstechniken und einem LC-System zur Trennung.

Figure 1 A typical disulfide bond (DSB) analysis workflow. (Analytical and Bioanalytical Chemistry 2018)Abbildung 1 Ein typischer Arbeitsablauf zur Analyse von Disulfidbrücken (DSB).
(Analytical and Bioanalytical Chemistry 2018)

Creative Enzymes bietet eine hochsensible HPLC-MS/MS-Plattform, die Disulfidbrücken in mehreren Proben aus verschiedenen Quellen analysieren kann. Darüber hinaus entwickeln wir fortschrittliche maschinelles Lernen-Strategien basierend auf sequenzbasierten Informationen. Darüber hinaus bieten wir Dienstleistungen zur Verifizierung von Disulfidartefakten und Disulfidengineering an. Unsere angebotenen Dienstleistungen umfassen Folgendes.

  • Algorithmische Analyse basierend auf Sequenzdaten.
  • Analyse von Disulfidbrücken durch die HPLC-MS/MS-Plattform.
  • Verifizierung von Disulfidartefakten.
  • Disulfidengineering.

Wenn Sie an uns interessiert sind, zögern Sie bitte nicht, uns zu kontaktieren.

Reference:

  1. Lakbub, J.C., Shipman, J.T., Desaire, H. (2018) Recent mass spectrometry-based techniques and considerations for disulfide bond characterization in proteins. Analytical and Bioanalytical Chemistry. 410(10): 2467-2484.

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