Enzymkonjugation mit Antikörpern

Etablierte Praktiken von Antikörper-Enzym-Konjugaten wurden bereits in enzymgebundenen Immunadsorptionstests (ELISAs), Western Blotting, Immunfärbung und Biosensoren angewendet. Für ELISA gibt es zwei Haupttypen von Enzymen, die häufig zur Konjugation mit sekundären Antikörpern verwendet werden, nämlich Horseradish Peroxidase (HRP) und Alkalische Phosphatase (AP).

Neuere Antikörper-Enzym-Konjugate (AEC) werden auch als therapeutische Mittel entwickelt, die präzises Targeting und hohe Aktivitäten bieten, die von traditionellen Antikörper-Wirkstoff-Konjugaten (ADC) nicht erreicht werden. Um eine maximale Extravasation und Penetration der Zielzelle zu erreichen, ist es erforderlich, dass das therapeutische Antikörper-Enzym-Produkt hauptsächlich ein 1:1 Antikörper/Enzym-Konjugat ist. In einigen Fällen muss auch die Konjugationsstelle kontrolliert werden.

Antikörper-Enzym-Konjugate werden erzeugt, indem kovalente Bindungen zwischen Enzym und Antikörper durch chemische Vernetzer, Enzymkatalyse oder Fusionsproteine induziert werden. Chemische Vernetzungsmethoden nutzen die enorme Vielfalt der verfügbaren Vernetzungsreagenzien, die sich in chemischer Funktionalität, Reaktivität und Größe unterscheiden. Zu den am häufigsten verwendeten Vernetzungsreagenzien gehören Glutaraldehyd, Maleimidgruppen und Aldehyde. Außerdem werden Fusionsproteine produziert, insbesondere für den Einsatz in der gezielten Enzym-Prodrug-Therapie (ADEPT). Zum Beispiel berichteten Ojima-Kato et al. kürzlich über die Entwicklung von „Zipbody“, einem Fab-Derivat mit Leucin-Zipper (LZ)-Paar an den C-Termini der schweren Kette (Hc) und der leichten Kette (Lc) von Fab, das die Assoziation und korrekte Paarung von Hc und Lc verbessert.

Creative Enzymes bietet Dienstleistungen zur Erzeugung von Antikörper-Enzym-Konjugaten an, einschließlich Design, Vorbereitung, Reinigung und Charakterisierung. Wir konzentrieren uns auf die Methodenentwicklung, um hohe Ausbeuten mit der erforderlichen Bioaktivität und einem kontrollierten Antikörper/Enzym-Verhältnis zu erreichen. Mit fortschrittlichen Techniken und Instrumenten bieten wir gereinigte Konjugate frei von Resten von Enzymen und Antikörpern an:

• Produktion von Antikörperfragmenten.
• Vorbereitung von Antikörper-Enzym-Konjugaten.
• Fusionsproteinstrategien.
• Reinigung von Konjugaten.
• Validierung von Konjugaten durch Massenspektrometrie.

Zugehörige Abschnitte

Enzymtechnik und -modifikation

Abbildung 1 Zipbody, eine Art Antikörper-Enzym-Fusionsprotein, wird verwendet, um Luciferase (Luc) oder grünes fluoreszierendes Protein (GFP) zu konjugieren.
(Journal of Bioscience and Bioengineering 2018)