Express Enzyme in Baculovirus/Insektenzellen

Im Laufe der letzten 30 Jahre hat sich das Baculovirus-Insektenzell-Expressionssystem zu einem der am häufigsten verwendeten Systeme für die routinemäßige Produktion rekombinanter Proteine entwickelt. Creative Enzymes führt aktiv die Weiterentwicklung des viralen Vektorsystems und die Entwicklung von modifizierten Insektenzelllinien durch. Wir bieten professionelle Dienstleistungen für die Enzymexpression im Baculovirus-Insekten-System an. Unsere herausragenden Fähigkeiten im Vektordesign und in der Zelltechnik werden die Effizienz Ihrer Forschung mit Zielenzymen erheblich steigern.

Bei der Expression von zytosolischen Enzymen, membranbindenden Proteinen oder Enzymen mit komplexeren posttranslationalen Modifikationen wird bevorzugt das Baculovirus-Insektenzell-Expressionssystem in Betracht gezogen. Viele technologische Verbesserungen erhöhen die Beliebtheit dieses Systems, einschließlich der Entwicklung einer Vielzahl von Transfervektoren, vereinfachten Methoden zur Isolierung und Quantifizierung rekombinanter Viren, Fortschritten in der Zellkulturtechnologie und der kommerziellen Verfügbarkeit von Reagenzien. Die Vorteile des Systems sind jedoch die entscheidenden Punkte, die berücksichtigt werden müssen.

• Posttranslationalen Modifikationen

Im Baculovirus-Insektenzell-Expressionssystem können die rekombinanten Enzyme ohne Komplikationen die richtigen eukaryotischen posttranslationalen Modifikationen bilden, einschließlich Phosphorylierung, N- und O-Glykosylierung, korrekter Spaltung des Signalpeptids, ordnungsgemäßer proteolytischer Verarbeitung, Acylierung, Palmitoylierung, Myristoylierung, Amidierung, Carboxymethylierung und Prenylierung. Als Ergebnis dieser Modifikationen können biologisch und antigenisch aktive Moleküle ordnungsgemäß produziert werden. Darüber hinaus kann im Gegensatz zu prokaryotischen Systemen die korrekte Proteinstruktur und die Bildung von S-S-Bindungen erreicht werden, was bei der Expression einiger großformatiger Enzyme ein Hindernis darstellen kann.

• Hohe Expressionsniveaus

Das zu klonende Gen wird unter die starke Kontrolle des viralen Polyhedrin-Promotors gestellt, was die Expression heterologer Enzyme von bis zu 30 % des Zellproteins ermöglicht. Darüber hinaus hat das Baculovirus-Insektenzell-System in Kombination mit der optimalen großtechnischen Kultivierung das Potenzial, große Mengen rekombinanter Enzyme zu produzieren.

• Sicherheit

Die Expressionsvektoren werden aus dem Baculovirus hergestellt, das Invertebraten, jedoch keine Wirbeltiere oder Pflanzen angreifen kann, was die Sicherheit gewährleistet. Die inhärente Sicherheit für Wirbeltiere macht das Baculovirus-Insekten-System zu einer attraktiven Alternative zu anderen höheren eukaryotischen Expressionssystemen.

Abbildung 1: Baculovirus-Insektenzell-Expressionssystem. In Zellen, die mit einem Wildtyp-Virus infiziert sind (a), werden große Mengen von Polyedern und p10 gebildet. In den meisten Fällen wird im rekombinanten Virus (b) der Polyhedrin- und/oder p10-Promotor verwendet, um die Expression eines fremden Gens zu steuern, und die Genkassette ersetzt das Polyhedrin-Gen, was zu einem Rekombinanten mit einem polyhedron-negativen Phänotyp führt, und (c) hohe Mengen rekombinanten Proteins werden anstelle von Polyhedrin produziert.

Aufgrund dieser Vorteile haben Insektenzellen gezeigt, dass sie nahezu authentische eukaryotische Proteine und Enzyme produzieren können. Daher wird dieses Expressionssystem häufig in der biomedizinischen Forschung sowie in der medizinischen und veterinärmedizinischen Praxis eingesetzt. Eine wichtige Anwendung ist die Produktion von Subunit-Impfstoffen, die auf Baculovirus-exprimierten Proteinen basieren. Weitere Anwendungen finden sich in der Expression neu entwickelter Enzyme zur Bestimmung enzymatischer Eigenschaften.

Mit der professionellen technischen Unterstützung und den umfangreichen Erfahrungen in der Molekularbiologie und Fermentation hat Creative Enzymes die Expertise in der Expression von Enzymen im Baculovirus-Insekten-System unter Beweis gestellt. Je nach Ihren speziellen Anforderungen bietet Creative Enzymes die Expression und Produktion in unterschiedlichen Maßstäben an. Jedes angeforderte Enzym wird unter standardisierten Kontrollen mit angehängten Analysezertifikaten produziert. Unser Expressionsservice ist sowohl in Bezug auf Zuverlässigkeit als auch Effizienz garantiert. Bitte kontaktieren Sie uns bei Fragen zu unserem Service.