Solubilisierung von Einschlusskörperchen

Creative Enzymes ist ein Biotech-Unternehmen, das auf verschiedene maßgeschneiderte Enzymdienstleistungen spezialisiert ist. Wir verfügen über jahrzehntelange Erfahrung in der Enzymproduktion und -reinigung für akademische und industrielle Projekte. Unsere Dienstleistungen haben von Tausenden von Kunden Lob erhalten. Mit den modernsten Reinigungsstrategien für rekombinante Enzyme werden die Produkte in kurzer Zeit und in hoher Qualität gemäß Ihren Bedürfnissen geliefert. Darüber hinaus ist Creative Enzymes motiviert, eng mit den Kunden zusammenzuarbeiten, falls besondere Anforderungen bestehen.

Escherichia coli werden am häufigsten zur Produktion rekombinanter Enzyme verwendet. Allerdings führt die hochgradige Expression in E. coli oft zu angesammelten Enzymen als unlösliche Aggregate in Form von Einschlusskörperchen. Einschlusskörperchen-Enzyme sind ohne biologische Aktivität und benötigen Solubilisierungs-, Refaltungs- und Reinigungsverfahren, um ihre Funktion wiederherzustellen. Der erste Schritt ist die Reinigung der Einschlusskörperchen. Danach kann das unlösliche Enzympellet mit Puffer, wie Guanidinhydrochlorid oder Harnstoff, gewaschen werden. Anschließend werden die gewaschenen Einschlusskörperchen resuspendiert und in einem Puffer, der ein starkes Denaturierungsmittel und bestimmte Reduktionsmittel enthält, inkubiert. Im Allgemeinen werden Einschlusskörperchen durch die Verwendung einer hohen Konzentration von Denaturierungsmitteln zusammen mit dem Reduktionsmittel solubilisiert. Die solubilisierten Enzyme werden dann durch langsame Entfernung des Denaturierungsmittels in Anwesenheit von Oxidationsmitteln refolded. Die Solubilisierung von Enzymen aus dem Einschlusskörperchen unter Verwendung hoher Konzentrationen chaotropischer Reagenzien führt zum Verlust der Sekundärstruktur, was zur Bildung von zufälligen Coil-Strukturen des Enzymaufbaus und zur Exposition der hydrophoben Oberfläche führt. Der Verlust der Sekundärstruktur während der Solubilisierung und die Wechselwirkungen zwischen den denaturierten Enzymmolekülen während der Refaltung, die zu ihrer Aggregation führen, gelten als die Hauptgründe für die schlechte Rückgewinnung bioaktiver Enzyme aus den Einschlusskörperchen.

Abbildung: Transmissionselektronenmikroskopische Aufnahmen von E. coli-Zellen, die das Fusionsprotein der β-gal-Insulinkette A produzieren (x17.500). Der Pfeil zeigt deutliche Einschlusskörperchen des Fusionsproteins an.
Referenz: Mukhopadhyay, Asok. Biotreatment, Downstream Processing and Modelling. Springer Berlin Heidelberg, 1997. 61-109.

Creative Enzymes verlässt sich auf die Expertise in Biochemie und struktureller Biologie, um den mühsamen und kostspieligen Prozess der Solubilisierung von Einschlusskörperchen durch herkömmliche Methoden zu vereinfachen. Unsere Reinigungsdienstleistungen bieten mehrere Vorteile:

• Hohe Ausbeuten an biologisch aktiven und löslichen Enzymen
• Zielenzyme mit struktureller Integrität und korrekter Konformation
• Eigenentwickelte Designmethodik
• In-House optimierte Enzymproduktionsprotokolle
• Starke Kundenunterstützung durch herausragende Fachleute
• Maßgeschneiderte Dienstleistungen für die Bedürfnisse der Kunden

Creative Enzymes verspricht, biologisch aktive Enzyme zeitnah und kostengünstig zu liefern. Zögern Sie nicht, uns für weitere Informationen über unsere Technologie und Dienstleistungen zu kontaktieren.