Enzymaktivitätsmessung von L-Gulonat 3-Dehydrogenase mittels spektrophotometrischer Assays

Creative Enzymes ist eine professionelle Institution, die genaue und zuverlässige Aktivitätsmessdienste anbietet. Unsere umfangreiche Erfahrung in der Bereitstellung schneller und effektiver Testmethoden garantiert genaue Assay-Ergebnisse. Darüber hinaus ist Creative Enzymes auch auf die Analyse von Enzymen spezialisiert, die von anderen Dienstleistern selten gemessen werden. Eines dieser Enzyme, L-Gulonat 3-Dehydrogenase, wurde jedoch von Creative Enzymes gut charakterisiert und gemessen, unter Verwendung einzigartiger Technologien.

L-Gulonat 3-Dehydrogenase (GDH; EC 1.1.1.45) ist eine Oxidoreduktase, die die Umwandlung von L-Gulonat zu 3-Dehydro-L-Gulonat katalysiert und NADH als Nebenprodukt produziert. GDH zeigt zusätzliche Dehydrogenase-Aktivität gegenüber mehreren anderen organischen Säuren mit 3-Hydroxylgruppen, wie L-3-Hydroxybutyrat und L-Threonat. Die anderen gebräuchlichen Namen dieses Enzyms sind:

• L-3-Aldonat-Dehydrogenase;
• L-3-Aldonsäure-Dehydrogenase;
• L-Gulonsäure-Dehydrogenase;
• L-Beta-Hydroxyäure-Dehydrogenase;
• L-Beta-Hydroxy-Säure-NAD⁺-Oxidoreduktase;
• L-3-Hydroxyäure-Dehydrogenase

L-Gulonat 3-Dehydrogenase ist ein NAD⁺-abhängiges Enzym. Es spielt eine Schlüsselrolle im Urinatzyklus, einem alternativen Glukose-Stoffwechselweg, der für die Biosynthese funktioneller Moleküle wie Glucuronid, Glycosaminoglykan und Ascorbinsäure unerlässlich ist. Das Enzym kommt in verschiedenen Geweben von Säugetieren und Drosophila melanogaster vor. Beim Menschen ist GDH jedoch nur in nicht-linsenhaltigen Geweben vorhanden, und sein Expressionsniveau ist in Geweben des hepatozellulären Karzinoms bei Patienten herunterreguliert. Bisher ist die einzige kristallographische Struktur der L-Gulonat 3-Dehydrogenase, die identifiziert wurde, die des Enzyms aus dem Kaninchen. Daher sind weitere Informationen basierend auf der Kristallstruktur von GDH aus anderen Quellen wünschenswert, um ein besseres Verständnis der funktionalen Natur dieser neuartigen Gruppe von Enzymen zu ermöglichen. Um den Forschungsbedarf dieses Enzyms zu decken, bietet Creative Enzymes geeignete Aktivitätsassays an, die die wachsende Lücke zwischen dem Wissen über Enzymologie und dem zunehmenden Interesse an der Verwendung des Enzyms in biologischen Industrien schließen. Wir haben zuverlässige spektrophotometrische Assays zur Quantifizierung der Enzymaktivität gezeigt. Da NAD⁺ und NADH unterschiedliche UV-Absorptionsprofile aufweisen, kann die katalytische Aktivität von EC 1.1.1.45 entweder durch die Verfolgung der Reduktion von NAD⁺ bei 260 nm oder der Oxidation von NADH bei 340 nm mit einem UV/Vis-Spektrometer gemessen werden.

Abbildung: Die Kristallstruktur der Kaninchen-L-Gulonat 3-Dehydrogenase.
Referenz: Yukuhiko Asada et al. J. Mol. Biol. 2010 401: 906–920

Creative Enzymes ist zweifellos ein führendes Unternehmen im Bereich der Enzymaktivitätsassays. Wir verfügen über die fortschrittlichste Ausrüstung und die unvergleichlichen Techniken zur Bestimmung der Enzymaktivität. Mit exzellenten Dienstleistungen und hochwertigen Tests wächst Creative Enzymes dramatisch mit der Unterstützung von Tausenden von Kunden, und wir möchten Ihr Unternehmen bedienen und Ihr Vertrauen in naher Zukunft gewinnen.