Messung der Enzymaktivität der mikrokokkalen Nuklease

Als Expert:innen für Enzymassays teilt Creative Enzymes unsere fortschrittlichen Methoden mit Ihnen. Wir bieten die umfassendste und aktuellste, optimierte Version der Aktivitätsprüfung für Hydrolasen. Die Ergebnisse für mikrokokkale Nuklease werden mit hoher Genauigkeit und Reproduzierbarkeit garantiert.

Mikrokokkale Nuklease (Nuklease T, EC 3.1.31.1) kann sowohl auf doppelsträngige als auch auf einzelsträngige Substrate wirken. Genauer gesagt ermöglicht ihre endonukleolytische Aktivität die Spaltung doppelsträngiger DNA oder RNA sowie einzelsträngiger Nukleinsäuren zu Nukleosid-3'-Phosphaten und 3'-Phosphophosphooligonukleotiden. Die Spaltgeschwindigkeit ist an der 5'-Seite von A oder T 30‑fach höher als bei G oder C. Durch die Hydrolyse durch das Enzym werden letztlich alle Sequenzen gespalten. Die Enzymaktivität ist strikt Ca²⁺-abhängig und wird durch EGTA leicht inaktiviert.

Unter verschiedenen Quellen wird die staphylokokkale mikrokokkale Nuklease als Modellprotein zur Untersuchung der Proteinfaltung und der enzymatischen Katalyse eingesetzt. Die Struktur der staphylokokkalen Nuklease T ist vollständig aufgeklärt. Sie umfasst lediglich 149 Aminosäurereste, enthält weder Disulfidbrücken noch freie Sulfhydrylgruppen und kann reversibel denaturiert und renaturiert werden. Für dieses Enzym wurden zahlreiche Anwendungen entwickelt. So ist es beispielsweise ein nützliches Werkzeug zur Kartierung der Chromatinstruktur in Eukaryoten sowie zur Bestimmung der Positionen von Nukleosomen innerhalb eines DNA-Abschnitts, um dynamische, im Rahmen der Genregulation induzierte Veränderungen zu identifizieren. In der Molekularbiologie kann das gereinigte Enzym als exogenes Reagenz zur Klärung zellulärer Extrakte eingesetzt werden und die Proteinreinigung erleichtern. In der klinischen Behandlung ist dieses Enzym ein attraktives und potenzielles Ziel für die Entwicklung antimalarischer Arzneimittel. Aufgrund der Bedeutung in Forschung und Therapie wurde eine große Anzahl von Varianten konstruiert, um die biochemischen und biophysikalischen Daten zu erweitern. Zur Unterstützung dieser Arbeiten bietet Creative Enzymes hochwertige Assay-Services für mikrokokkale Nuklease an.

Abbildung: Die Kristallstruktur des ternären Komplexes aus staphylokokkaler mikrokokkaler Nuklease, Ca²⁺ und dem Inhibitor Desoxythymidin-3',5'-bisphosphat (pdTp).
Referenz: Loll, P.J. et al. Proteins 1989 5: 183-201.

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