Mutagenese aus vom Kunden bereitgestellten Vorlagen

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Kreative Enzyme bereitstellt Mutagenese aus vom Kunden bereitgestellten Vorlagen, ein zentrales Angebot innerhalb unseres Site-spezifische Mutagenese (SDM) DienstleistungenDieser Service richtet sich an Kunden, die bereits verifiziertes plasmidisches DNA oder Expressionskonstrukte besitzen und gezielte Mutationen mit Präzision und Zuverlässigkeit einführen möchten. Ob Sie strukturelle-Funktions-Beziehungen untersuchen, die katalytische Leistung verbessern oder die Enzymstabilität optimieren möchten, wir liefern genaue Mutagenese-Ergebnisse durch hochpräzise Methoden und strenge Qualitätskontrollen. Unsere Plattform integriert wissenschaftliche Beratung, optimiertes Reaktionsdesign und Sequenzverifizierung, um sicherzustellen, dass jede Mutation genau wie spezifiziert ist – bereit für die nachgelagerte Expression, Charakterisierung oder Screening.

Einführung in die Mutagenese anhand von vom Kunden bereitgestellten Vorlagen

In der Enzymtechnik und funktionellen Genomik, gerichtete Mutagenese bleibt eines der leistungsstärksten Werkzeuge zur Untersuchung und Verbesserung von Protein-Eigenschaften. Allerdings erfordert das Erreichen zuverlässiger und reproduzierbarer Mutationen, selbst wenn die Kunden ihre eigenen Expressionsvektoren bereitstellen, technische Präzision und gründliche Validierung.

Die traditionelle Mutagenese im Labor stößt häufig auf Probleme wie unvollständige Primer-Designs, geringe Effizienz bei der PCR-Amplifikation, Instabilität von Plasmiden oder Off-Target-Mutationen. Bei Creative Enzymes nutzen wir optimierte Protokolle, automatisierte Reaktionssysteme und strenge Qualitätskontrollstandards, um diese Herausforderungen zu überwinden.

Durch die Kombination vom Kunden bereitgestellte Vorlagen mit unserem Mutagenese-ExpertiseWir ermöglichen die schnelle Erstellung von Einzelstandort- oder Mehrstandortvarianten mit außergewöhnlicher Genauigkeit. Unser End-to-End-Workflow – von der Vorlagenverifizierung bis zur endgültigen Sequenzierungsbestätigung – gewährleistet ein hohes Vertrauen in die Integrität jedes gelieferten Konstrukts.

Mutagenesis service using customer templates

Was wir anbieten

Wir bieten hochpräzise Mutagenesedienste mit von Kunden bereitgestellten Vorlagen an und bieten folgende Möglichkeiten:

Mutagenese mit vom Kunden bereitgestellten Vorlagen

Wir führen Mutagenese direkt an von Kunden bereitgestellten Plasmiden oder DNA-Konstrukten durch und bewahren dabei Ihr Vektor-Backbone und den Klonierungskontext.

Einzel- und Mehrfachstellen-Mutagenese

Einführung von einer oder mehreren gezielten Mutationen (Substitution, Insertion, Deletion) gemäß den Vorgaben des Kunden.

Vorlagenüberprüfung vor der Mutagenese

Optionale Vorabprüfung und Sequenzierungsüberprüfung des bereitgestellten Plasmids zur Sicherstellung der Genauigkeit vor der Modifikation.

Flexible Methodenwahl

Verwendung von PCR-basierten, rekombinationsgesteuerten oder oligonukleotidgerichteten Strategien, abhängig von der Komplexität des Konstrukts.

Vollständige Mutationsvalidierung

Vollständige Sequenzierung des offenen Leserahmens und Verifizierung der Restriktionsverdau nach Mutagenese.

Bibliothekskonstruktionsoption

Generierung von kombinatorischen oder Sättigungs-Mutagenesebibliotheken für Enzymoptimierungsprojekte.

Vektorpflege

Ihr ursprüngliches Plasmid-Rückgrat, der Promotor und die Selektionsmarker sind vollständig erhalten.

Schnelle Lieferung

Verifizierte Mutantenkonstrukte werden mit Sequenzierungsberichten, Vektorkarten und Mutationsbestätigungszertifikaten geliefert.

Service-Workflow

Service workflow for site-directed mutagenesis using customer-provided templates

Service-Details

Parameter	Spezifikation
Mutationsarten	Punktmutation, Insertion, Deletion oder kombinatorische Mutationen
Vorlagenanforderungen	Reinigte Plasmid-DNA oder verifiziertes Vektorkonstrukt (≥50 ng/µL)
Vektor-Kompatibilität	Alle Standard-Klonierungs- und Expressionsvektoren (bakteriell, hefe, insekt, säugetier)
Überprüfungsmethode	Vollständige Sanger-Sequenzierung
Durchlaufzeit	7–15 Werktage, abhängig von der Komplexität
Liefergegenstände	Verifiziertes Plasmid (≥2 µg), Sequenzierungsbericht, Vektorkarte, QC-Dokumentation
Optionale Zusatzleistungen	Expressionsprüfung, Proteinreinigung oder Erweiterung von Mutationsbibliotheken

Verbindungsdienste

Dieser Service ergänzt unser Schwesterangebot:

Mutagenese aus von Creative Enzymes synthetisierten Vorlagen

Zusammen bilden diese beiden Dienste die Grundlage unseres Kern-Seitengerichtete Mutagenesediensteund bieten vollständige Flexibilität für Forschungs- und Industriebedürfnisse. Ob Sie Ihren eigenen Vektor bereitstellen oder einen vollständig integrierten Workflow von Synthese bis Mutation anfordern, wir gewährleisten genaue, reproduzierbare und hochwertige Ergebnisse für jedes Projekt.

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Warum Sie uns wählen sollten

Präzision bei Ihren Konstruktionen

Wir arbeiten direkt mit Ihren bereitgestellten Plasmiden und gewährleisten vollständige Kontrolle über die Vektor-Konfiguration und den experimentellen Kontext.

Flexible Mutationsoptionen

Unterstützung für einzelne, multiple und kombinatorische Mutationen, die auf Forschungsziele zugeschnitten sind.

Fortgeschrittene Methodik

Die Nutzung von hochpräziser PCR und rekombinationsbasierten Ansätzen minimiert unerwünschte Mutationen.

Schnelle Bearbeitung

Optimierte Arbeitsabläufe reduzieren die Projektzeit, ohne die Qualität zu beeinträchtigen.

Umfassende Validierung

Jede modifizierte Konstruktion ist vollständig sequenziert, um eine genaue Übereinstimmung mit dem Design sicherzustellen.

Vertraulichkeit und Schutz des geistigen Eigentums

Alle Kundensequenzen und Daten werden unter strengen Vertraulichkeitsvereinbarungen behandelt.

Vertretende Fallstudien

Fall 1: Einzelpunktmutation zur Verbesserung der Cofaktorpräferenz

Kundenbedarf:

Eine Forschungsgruppe für metabolische Ingenieurwissenschaften strebte an, die Cofaktor-Spezifität eines wichtigen Oxidoreduktase-Enzyms von NADH auf NADPH zu ändern, um die Effizienz des Stoffwechselwegs in einem biosynthetischen Produktionssystem zu verbessern. Trotz der vorhandenen E. coli Expressionsvektor, ihre vorherigen Mutagenesetests litten unter geringer Reproduzierbarkeit und Hintergrundkontamination durch Plasmide.

Unser Ansatz:

Der Kunde lieferte ein verifiziertes pET-28a(+)-basiertes Konstrukt, das einer vorläufigen Plasmidintegritätsbewertung bei Creative Enzymes unterzogen wurde. Mit einer hochpräzisen PCR-basierten gerichteten Mutagenesemethode führten wir eine einzelne Aminosäureaustausch (D199S) an einer Stelle ein, die bekannt dafür ist, die Cofaktorbindung zu beeinflussen. Das mutierte Plasmid wurde dann vollständig sequenziert, um das Vorhandensein der korrekten Mutation und das Fehlen sekundärer Fehler zu bestätigen, bevor es zur Expressionstestung geliefert wurde.

Ergebnis:

Die entwickelte Oxidoreduktase zeigte eine sechsmal höhere katalytische Effizienz gegenüber NADPH, während sie eine erhebliche NADH-Aktivität beibehielt. Das gesamte Projekt – von der Mutagenesedesign bis zur bestätigten Plasmidlieferung – wurde innerhalb von zwei Wochen abgeschlossen, was es dem Kunden ermöglichte, schnell mit kinetischen und strukturellen Analysen fortzufahren.

Fall 2: Multi-Standort-Mutagenese zur Verbesserung der Enzymstabilität

Kundenbedarf:

Ein Hersteller von industriellen Enzymen benötigte eine thermostabile Lipase-Variante, die für die Hochtemperatur-Biokatalyse in kontinuierlichen Produktionssystemen geeignet ist. Das Ziel war es, vier stabilisierende Substitutionen gleichzeitig einzuführen und dabei den zeitaufwändigen, schrittweisen Mutagenese-Ansatz zu vermeiden, der zuvor die Produktentwicklung verzögert hatte.

Unser Ansatz:

Nach Erhalt des proprietären Lipase-Plasmids des Kunden entwarfen wir vier gezielte Primer für die parallele oligonukleotidgerichtete Mutagenese. Mit unserem optimierten Workflow für Multisite-Mutagenese wurden alle Substitutionen in einer einzigen Runde von Amplifikation und Ligation eingeführt. Der vollständige Konstrukt wurde einer Volllängen-Sequenzierung unterzogen, um die genaue Incorporation der Mutationen und die Integrität des Plasmids sicherzustellen.

Ergebnis:

Die resultierende Lipase-Variante zeigte einen Anstieg der Schmelztemperatur (Tm) um 9 °C im Vergleich zum Wildtyp, während sie ihre ursprüngliche katalytische Aktivität und Substratspezifität beibehielt. Der verifizierte Ein-Schritt-Workflow beseitigte mehrere Klonierungs- und Verifizierungsrunden, verkürzte den Projektzeitrahmen um etwa 40 % und bot eine robuste Vorlage für die weitere industrielle Enzymentwicklung.

Häufig gestellte Fragen

Q: Was sind die Anforderungen für die Einreichung einer Vorlage?

A: Bitte stellen Sie gereinigte Plasmid-DNA (>50 ng/µL) zur Verfügung und, falls verfügbar, die vollständige Sequenz und den Vektorkarte. Dies gewährleistet ein optimales Primerdesign und eine genaue Zielsetzung der Mutationen.
Q: Überprüfen Sie die bereitgestellte Vorlage, bevor Sie Mutagenese durchführen?

A: Ja, wir können optional das bereitgestellte Konstrukt sequenzieren, bevor wir fortfahren. Dieser Schritt stellt sicher, dass keine bereits vorhandenen Mutationen die gewünschte Modifikation beeinträchtigen.
F: Was ist, wenn mein Plasmid groß ist oder sich wiederholende Regionen enthält?

A: Wir haben Erfahrung mit komplexen Plasmiden von bis zu 20 kb und können unsere Protokolle für hoch-GC-reiche oder repetitive Sequenzen anpassen.
Q: Können Sie in einer Runde Mehrfachmutationen an mehreren Stellen durchführen?

A: Ja. Unser proprietäres Multiplex-SDM-Verfahren ermöglicht die gleichzeitige Einführung mehrerer Mutationen und minimiert die Klonierungsschritte.
Q: Wie stellen Sie die Vertraulichkeit von vom Kunden bereitgestellter DNA sicher?

A: Alle Kundenmaterialien werden unter strenger Vertraulichkeit und Geheimhaltungsvereinbarungen verarbeitet, mit sicheren Datenmanagement- und Entsorgungsprotokollen.
Q: Können Sie bei der downstream Proteinexpression nach der Mutagenese helfen?

A: Ja. Creative Enzymes bietet optionale Nachgelagerte Dienste einschließlich der Proteinexpression, -reinigung und funktionellen Assays, um Ihren Workflow zur Enzymtechnik zu beschleunigen.

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Dienstleistungen & Produkte von Interessierten

Projektbeschreibung:

Nur für Forschungs- und Industriezwecke. Nicht für den persönlichen Gebrauch bestimmt. Bestimmte Produkte in Lebensmittelqualität eignen sich für die Formulierungsentwicklung in Lebensmitteln und verwandten Anwendungen.

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