Messung der Enzymaktivität der Phospholipase D

Creative Enzymes ist ein führendes Unternehmen, das hochwertige bioanalytische Dienstleistungen sowie kundenspezifische Auftragsforschung im Bereich der Enzymaktivitätsanalyse anbietet, um die Anforderungen unserer akademischen und industriellen Kunden zu erfüllen. Unsere Leidenschaft für höchste Qualität und einzigartige Services wird nur von unserem exzellenten Ruf im Markt übertroffen. Creative Enzymes ist stolz darauf, einen zuverlässigen enzymatischen Assay für Phospholipase D anzubieten.

Phospholipase D (EC 3.1.4.4; PLD) ist ein ubiquitär vorkommendes Enzym, das die Hydrolyse der Phosphodiesterbindung von Phospholipiden (PLs) katalysiert und dabei Phosphatidsäure (PA) sowie einen Alkoholrest erzeugt. Neben der hydrolytischen Aktivität katalysiert PLD auch die Umwandlung polarer Kopfgruppen von PLs durch einen als Transphosphatidylierung bezeichneten Prozess. Die Transphosphatidylierung ist insbesondere für die Synthese natürlicherweise weniger häufig vorkommender PLs wie Phosphatidylethanolamin (PE), Phosphatidylserin (PS) und Phosphatidylglycerol (PG) aus hoch abundantem Ausgangsmaterial wie PC oder Lecithin von Nutzen. Synthetisierte PLs können als Emulgatoren, als Bestandteile von Kosmetika, in medizinischen Formulierungen sowie für Liposomenpräparationen eingesetzt werden.

Abbildung 1: Durch PLD katalysierte Reaktionen: Hydrolyse (A) und Transphosphatidylierung (B). R₁ und R₂ bezeichnen Alkylketten der Fettsäurereste, während X1 und X2 die polaren Kopfgruppen darstellen.
Referenz: Damnjanović J, Iwasaki Y. Journal of Bioscience & Bioengineering, 2013, 116(3):271-280.

PLD wurde erstmals in den 1940er-Jahren in Karotten- und Kohlblättern entdeckt. Bis heute ist bekannt, dass PLDs in Viren, Prokaryoten sowie Eukaryoten (Säugetiere, Hefen, Pflanzen) vorkommen. Die Mehrzahl der PLDs gehört zur sogenannten PLD-Superfamilie, die PLDs, Cardiolipin-Synthasen (CLS), Phosphatidylserin-Synthasen (PSS), Pockenvirus-Hüllproteine, ein murines Yersinia-Toxin (Ymt), Tyrosyl-DNA-Phosphodiesterase sowie mehrere Nukleasen umfasst. Alle Mitglieder der PLD-Superfamilie enthalten ein oder zwei Kopien des konservierten HxKxxxxD-Motivs (wobei x für eine beliebige Aminosäure steht). Dieses HKD-Motiv, insbesondere der Histidinrest, ist für die Katalyse von entscheidender Bedeutung.

Funktionell können PLDs als Werkzeug beim Screening von Keimplasma auf Dürretoleranz nützlich sein. Darüber hinaus können PLDs zur Herstellung von Octadecylphospho-L-serin eingesetzt werden, einem Alkylphosphatester mit antitumoraler Aktivität. Zudem dienen PLDs als Regulatoren verschiedener kritischer zellulärer Prozesse, darunter Vesikeltransport, Endozytose, Exozytose und Mitose. Abweichungen in der PLD-Expression wurden mit der Progression zahlreicher unterschiedlicher Krebserkrankungen sowie mit Morbus Parkinson und Morbus Alzheimer in Verbindung gebracht. Daher führt die bedeutende Nutzung zu einer hohen Nachfrage nach der Überwachung der PLD-Aktivitäten.

Creative Enzymes ist in der Lage, hochpräzise Enzymaktivitätsassays für PLDs bereitzustellen. Der spektrophotometrische Assay gilt als zuverlässige und kosteneffiziente Methode zur Messung der Aktivität dieses Enzyms. Die Qualität unserer Ergebnisse wird durch modernste spektrophotometrische Instrumentierung sichergestellt. Insgesamt ist Creative Enzymes Ihr optimaler Partner, der für höchste Kundenzufriedenheit bekannt ist.

Abbildung 2: Kristallstruktur der Phospholipase D aus Streptomyces antibioticus.
PDB: 2ZE4