Vorlagen-DNA-Sequenzierung für zufällige Mutagenese und DNA-Shuffling

Genau und umfassend Vorlage DNA-Sequenzierung bildet das Fundament erfolgreicher Enzym-Engineering-Projekte, die sich mit zufällige Mutagenese und DNA-Shuffling. Bei Kreative EnzymeWir bieten hochpräzise DNA-Sequenzierungsdienste an, die speziell entwickelt wurden, um die Integrität der Vorlage vor jeglichen Mutagenese- oder Rekombinationsexperimenten zu überprüfen und zu validieren.

Unsere Sequenzierungs-Workflows kombinieren Sanger-Sequenzierung für kürzere Konstrukte mit Next-Generation-Sequenzierung (NGS) für große oder komplexe Vorlagen, um vollständige Abdeckung und zuverlässige Mutationsdetektion zu gewährleisten. Durch detaillierte Qualitätsanalysen, Kontaminationsscreening und Fehlerkorrektur helfen wir unseren Kunden, verifizierte Vorlagen zu erstellen, die als robuste Ausgangsmaterialien für zufällige Diversifizierung dienen.

Durch die Bereitstellung vollständiger Sequenzbestätigung und Ausrichtungsberichte minimiert Creative Enzymes experimentelle Unsicherheiten und gewährleistet die Integrität der DNA-Vorlagen, die jeder erfolgreichen Enzym-Engineering-Kampagne zugrunde liegen.

Hintergrund: Beginn von Protein-Engineering-Projekten mit DNA-Vorlagen

Zufällige Mutagenese und DNA-Shuffling auf das Prinzip der genetischen Vielfalt verlassen: Durch die Einführung zufälliger Veränderungen oder das Rekombinieren von Fragmenten verwandter Gene können Wissenschaftler riesige evolutionäre Landschaften erkunden, um verbesserte Enzymvarianten zu entdecken. Dieser Prozess ist jedoch nur so zuverlässig wie die startende DNA-Vorlage.

Eine unverifizierte oder fehleranfällige Vorlage kann Artefakte einführen, irreführende Ergebnisse liefern oder sogar ganze Bibliotheken von Mutanten ungültig machen. Geringfügige Sequenzierungsfehler, Leserasterverschiebungen oder falsche Plasmidannotationen können zu vorzeitigen Trunkierungen, veränderten Leserahmen oder unerwünschten Mutationen führen, die sowohl die Enzymaktivität als auch die Interpretierbarkeit beeinträchtigen.

Um solche Probleme zu vermeiden, Vorlage DNA-Sequenzierung ist ein wesentlicher Schritt in der upstream-Prozesskette. Er bestätigt, dass die für die Mutagenese oder Rekombination verwendete DNA-Sequenz genau mit dem beabsichtigten Design übereinstimmt und frei von unerwünschten Mutationen oder Kontaminationen ist.

Bei Creative Enzymes gewährleistet unser Template-DNA-Sequenzierungsdienst für zufällige Mutagenese und DNA-Shuffling, dass Ihre Template-DNA mit wissenschaftlicher Strenge und dokumentierter Klarheit verifiziert wird. Diese grundlegende Gewährleistung eliminiert das Risiko, versteckte Sequenzfehler durch nachgelagerte Bibliothekskonstruktion, Expression und Screening-Prozesse zu propagieren.

Abbildung 1. Der erste Schritt beim DNA-Shuffling besteht darin, die elterlichen Sequenzen mithilfe des Enzyms DNase I zufällig zu fragmentieren. (Moore, 2002)

Was wir anbieten: Template-DNA-Sequenzierung

Unsere DNA-Sequenzierungsdienste mit Vorlagen sind darauf ausgelegt, volles Vertrauen in Ihre Ausgangsmaterialien für zufällige Mutagenese oder DNA-Shuffling zu bieten. Egal, ob Sie mit von Kunden bereitgestellten Plasmiden, PCR-Produkten oder synthetischen Konstrukten arbeiten, Creative Enzymes gewährleistet Genauigkeit, Reproduzierbarkeit und Rückverfolgbarkeit in jeder Phase.

Service-Workflow

Dienstleistungen Eigenschaften

Anfrage

Warum Sie sich für unsere Dienstleistungen entscheiden sollten

Fallstudien und Erfolgsgeschichten

Häufig gestellte Fragen

• Q: Welche Arten von DNA-Vorlagen können Sie sequenzieren?

  A: Wir akzeptieren Plasmide, PCR-Amplikate und lineare oder zirkuläre DNA-Konstrukte. Für große oder komplexe Vorlagen wird NGS empfohlen.

• Q: Welche Sequenzierungsplattform sollte ich wählen – Sanger oder NGS?

  A: Die Sanger-Sequenzierung ist ideal für kurze, gut charakterisierte Gene (<3 kb). Für größere Konstrukte oder Projekte, die eine extrem hohe Genauigkeit erfordern, bietet NGS eine vollständige Abdeckung und Variantenentdeckung.

• F: Wie stellen Sie die Genauigkeit der Sequenzierung sicher?

  A: Wir führen mehrere überlappende Lesungen durch, fügen interne Kontrollen ein und validieren die Ergebnisse mit Referenzsequenzen. Alle Daten unterliegen einer doppelten manuellen und computergestützten Überprüfung.

• Q: Können Sie Punktmutationen oder geringfügige Verunreinigungen in Plasmidpools nachweisen?

  A: Ja. NGS kann Varianten und Kontaminanten mit niedriger Häufigkeit bis zu 0,1 % Nachweisgrenze erkennen, was ideal ist, um elterliche Bibliotheken vor DNA-Shuffling zu überprüfen.

• Was passiert, wenn die Sequenzierung einen Fehler in meiner Vorlage aufdeckt?

  A: Wir bieten Sequenzkorrektur durch standortspezifische Reparatur oder von neuem Synthese. Korrigierte Konstrukte werden neu sequenziert, um die Genauigkeit zu bestätigen.

• F: Wie lange dauert die Sequenzierung und Analyse?

  A: Die typische Bearbeitungszeit beträgt 5–10 Werktage, abhängig von der Komplexität der Vorlage und der gewählten Sequenzierungsmethode.

• Q: Wie werden die Ergebnisse übermittelt?

  A: Sie erhalten rohe Sequenzdaten, Chromatogramme, Alignierungsberichte, annotierte Karten und QC-Zusammenfassungen. Optionale physische Lieferungen umfassen verifiziertes Plasmid-DNA oder Glycerol-Stämme.

• Q: Werden meine Sequenzdaten vertraulich behandelt?

  A: Ja. Alle Kundeninformationen, Sequenzen und Ergebnisse sind durch strenge Vertraulichkeitsvereinbarungen geschützt, und die Kunden behalten das vollständige geistige Eigentum.