Enzymaktivitätsmessung für 4-Hydroxybenzoat 3-Monooxygenase

Mit Jahren an Erfahrung in der Entwicklung und Optimierung enzymatischer Assays ist Creative Enzymes zu einem der zuverlässigsten Dienstleister für die Messung der Enzymaktivität auf dem globalen Markt geworden. Unsere Fähigkeiten sind umfangreich und decken alle Aspekte der Quantifizierung der Enzymaktivität für eine große Anzahl verschiedener Enzymtypen ab. Hier ist Creative Enzymes stolz darauf, den zuverlässigen Enzymaktivitätsassay für 4-Hydroxybenzoat 3-Monooxygenase anzubieten.

4-Hydroxybenzoat 3-Monooxygenase (EC 1.14.13.2; 4-Hydroxybenzoat, NADPH: Sauerstoff Oxidoreduktase (3-Hydroxylierung)) ist der Prototyp einer großen Familie von pyridin-nukleotidabhängigen Flavoprotein-Monooxygenasen. Dieses Enzym katalysiert die Einfügung eines Dioxygenatoms in p-Hydroxybenzoat (p-OHB), um 3,4-Dihydroxybenzoat (3,4-DOHB) zu produzieren. Die von der 4-Hydroxybenzoat 3-Monooxygenase vermittelte Umwandlung von 4-Hydroxybenzoat ist eine mehrstufige Reaktion mit drei Substraten und drei Produkten. In der ersten Halb-Reaktion binden p-OHB und NADPH an das Enzym, und NADPH reduziert den FAD-Kofaktor. In den folgenden oxidativen Reaktionen reagiert das reduzierte Flavin mit Sauerstoff, um Flavin C4a-Hydroperoxid zu bilden, und der distale Sauerstoff des Hydroperoxids wird an Position 3 des Substrats übertragen.

Die Analyse der Struktur-Funktions-Beziehungen in der 4-Hydroxybenzoat 3-Monooxygenase hat die Rolle von konformationellen Änderungen beleuchtet, die im katalytischen Mechanismus wichtig sind. Kontrollierte Katalyse wird durch die Bewegung des Flavins und des Proteins zwischen drei Konformationen, “in”, “out” und “open”, erreicht. Die “open”-Konformation ist entscheidend für die Substratbindung und die Produktfreisetzung, die “in”-Konformation für die Reaktion mit molekularem Sauerstoff und Hydroxylierung, und die “out”-Konformation für die Reduktion von FAD durch NADPH. Darüber hinaus sollte angemerkt werden, dass die Struktur der 4-Hydroxybenzoat 3-Monooxygenase ungewöhnlich ist, da es kein erkennbares Domänen für die Bindung von NADPH gibt, die an der Reaktion beteiligt ist.

Abbildung: Die Kristallstruktur der 4-Hydroxybenzoat 3-Monooxygenase von Pseudomonas aeruginosa.
PDB: 1K0I

Da der Aktivierungsmechanismus der Reaktion, die von der 4-Hydroxybenzoat 3-Monooxygenase katalysiert wird, unklar ist und die reduktive Reaktion, die NADPH betrifft, noch unbekannt ist, könnte der Aktivitätsassay dieses Enzyms schwierig und komplex sein. Um dieses knifflige Problem zu lösen, bietet Creative Enzymes einen professionellen Enzymaktivitätsassay für 4-Hydroxybenzoat 3-Monooxygenase an, um alle Hindernisse für deren weitere Entwicklung und Forschung zu beseitigen. Wir verwenden eine zuverlässige spektrophotometrische Methode, um die Enzymaktivität zu bestimmen, indem wir den Verbrauch von NADPH bei 340 nm überwachen.

Creative Enzymes ist in der Lage, gemeinsam mit unseren Kunden spezifische Probleme zu lösen, die bei der Messung der Enzymaktivität auftreten. Die enge Zusammenarbeit mit unseren Kunden ist ein wesentlicher Bestandteil unseres Services, und viele Kunden sind uns seit vielen Jahren treu. Insgesamt verpflichtet sich Creative Enzymes, die höchste Zufriedenheit der Kunden zu erreichen und ständig seine Produkte, Dienstleistungen und das Qualitätsmanagementsystem zu verbessern.