Messung der Enzymaktivität der Pyranoseoxidase mittels spektrophotometrischer Assays

Creative Enzymes ist bekannt für führende Technologien und umfassende Expertise im Bereich enzymatischer Dienstleistungen. Wir sind insbesondere auf kundenspezifische Messungen der Enzymaktivität spezialisiert. Zur Sicherstellung der höchstmöglichen Qualität unserer Leistungen setzen wir modernste spektrophotometrische Instrumentierung ein. Creative Enzymes gewährleistet die Bereitstellung hochpräziser und zeitnaher Enzymaktivitätsassays für Pyranoseoxidase.

Pyranoseoxidase (P2O) (EC 1.1.3.10; Glucose-2-Oxidase, Pyranose-2-Oxidase) ist ein Enzym, das die Oxidation von D-Glucose und mehreren weiteren Aldopyranosen an der C-2-Position katalysiert und dabei 2-Dehydro-D-Glucose sowie die entsprechenden 2-Ketoaldosen bildet, begleitet von der Reduktion von O₂ zu H₂O₂. Das Enzym ist bei holzabbauenden Basidiomyceten weit verbreitet. Pyranoseoxidase wurde aus verschiedenen Mikroorganismen isoliert und charakterisiert, darunter Phanerochaete chrysosporium, Phlebiopsis gigantea, Trametes versicolor sowie einige nicht näher identifizierte Basidiomyceten. Im Allgemeinen handelt es sich bei Pyranoseoxidase um ein relativ großes, homotetrameres Protein, das kovalent an Flavinadenindinukleotid (FAD) gebunden ist. Auf Basis von Sequenz- und Strukturanalysen wird dieses Enzym als Mitglied der Glucose-Methanol-Cholin-(GMC)-Oxidoreduktase-Familie klassifiziert. Pyranoseoxidase ist bevorzugt im periplasmatischen Raum der Hyphen lokalisiert und gilt als wesentliche Quelle endogenen H₂O₂, eines notwendigen Cosubstrats ligninabbauender Peroxidasen. Der systematische Name dieser Enzymklasse lautet Pyranose:Oxygen-2-Oxidoreduktase.

In vivo umfassen die Substrate der Pyranoseoxidase D-Glucose, D-Galactose und D-Xylose, die in Lignocellulose reichlich vorhanden sind und zu 2-Keto-D-Glucose, 2-Keto-D-Galactose bzw. 2-Keto-D-Xylose oxidiert werden. Darüber hinaus oxidiert Pyranoseoxidase auch weitere Kohlenhydrate, wie L-Sorbose, D-Glucono-1,5-Lacton und D-Allose. Das Substratspektrum variiert in gewissem Umfang, wenn Pyranoseoxidase aus unterschiedlichen Pilzen isoliert wird. In den letzten Jahren hat Pyranoseoxidase als Schlüsselkatalysator in der Analytik, Diagnostik und Kohlenhydratchemie zunehmend an Bedeutung gewonnen. Pyranoseoxidase kann als Schlüsselkomponente von Glucose-Biosensoren zur quantitativen Bestimmung von D-Glucose im Blut eingesetzt werden. Darüber hinaus wird dieses Enzym in der klinischen Chemie auch als diagnostisches Enzym betrachtet, da es mit 1,5-Anhydro-D-Glucitol reagieren kann, einem wichtigen Marker zur Beurteilung der glykämischen Kontrolle bei Diabetespatienten.

Insgesamt wird von vielen Forschenden ein vertieftes Verständnis der Pyranoseoxidase angestrebt, insbesondere hinsichtlich der katalytischen Mechanismen und der Kinetik. Creative Enzymes bietet seinen Kunden mit Stolz hochpräzise Messungen der Enzymaktivität an. Unser spektrophotometrischer Assay hat sich als äußerst zuverlässige Methode erwiesen. Die Pyranoseoxidase-Aktivität wird bei 420 nm bestimmt, indem die Bildung von H₂O₂ spektrophotometrisch gemessen wird. Mit unserer umfassenden Erfahrung ist Creative Enzymes Ihr verlässlicher Partner für wissenschaftliche Forschung und Produktentwicklung im Zusammenhang mit Pyranoseoxidase.

Abbildung: Die Kristallstruktur der Pyranoseoxidase aus Trametes ochracea.
PDB: 1TT0