Enzymaktivitätsmessung der Carboxylatreduktase

Creative Enzymes ist ein Pionier in der Bestimmung der Enzymaktivität. Unsere umfangreiche Erfahrung in der Bereitstellung schneller und effektiver Testmethoden garantiert genaue Assay-Ergebnisse. Darüber hinaus haben wir die Fähigkeit, Messungen unter strengen anaeroben Bedingungen für einige einzigartige Enzyme, wie Carboxylat-Reduktase, bereitzustellen.

Carboxylat-Reduktase gehört zur Familie der wolframhaltigen Aldehyd-Oxidoreduktasen (AOR). Als gemeinsame Struktur der AOR-Familie befindet sich das Wolframion im enzymatischen aktiven Zentrum, das von zwei Pyranopterin-Kofaktoren und einer Oxogruppe koordiniert wird. Neben Pyranopterin werden auch Molybdopterin, Pterin und FAD (Flavin-Adenin-Dinukleotid) als Kofaktoren gefunden. Dieses Enzym katalysiert die Dehydrierung verschiedener Aldehyde sowie die Reduktion von nicht-aktivierten Carboxylaten zu Aldehyden. Die Katalysereaktion benötigt Elektronenakzeptoren, wie Benzylviologen und Methylviologen, die als künstliche Elektronenakzeptoren anstelle von NAD(P) dienen. Dieses Enzym kann auf mehrere Aldehyde wie Acetaldehyd, Butyraldehyd und Benzaldehyd wirken, um die entsprechenden Säuren zu bilden. In umgekehrter Richtung werden nicht-aktivierte Säuren von Viologen reduziert, um Aldehyde zu erzeugen, jedoch nicht die entsprechenden Alkohole. In der Natur wurde Carboxylat-Reduktase hauptsächlich aus hyperthermophilen Archaeen wie Pyrococcus furiosus und Thermococcus litoralis sowie aus acetogenen Bakterien wie Moorella thermoacetica und Clostridium formicoaceticum isoliert.

Dieses Enzym ist am wichtigsten chemischen Verbindungenstoffwechsel in Mikroorganismen, dem Pyruvatstoffwechsel, beteiligt. Durch die gegenseitige Umwandlung von Acetat und Acetaldehyd kann dieses Enzym das Niveau von Aldehyd und Carboxylat ausgleichen. Die Anwendungen dieses Enzyms haben allmählich Aufmerksamkeit erregt. Viele Aldehyde dienen als gute Substrate für dieses Enzym, sodass die Enzymaktivität modifiziert werden kann, um nur spezifische Substrate anzusprechen, was in der synthetischen Biologie nützlich wird. Die Aktivitätsmessung dieses Enzyms erfordert besondere Vorsicht und Handhabung. Es wurde berichtet, dass die Enzymaktivität in Gegenwart von Sauerstoff stark abnimmt. Zum Beispiel ist das Enzym aus Clostridium formicaceticum sehr empfindlich gegenüber Sauerstoff, insbesondere im reduzierten Zustand, und das reduzierte Enzym verliert nach 10 Minuten 80 % der Aktivität. Um den Einfluss von Sauerstoff zu vermeiden, führt Creative Enzymes vollständig anaerobe Assays durch, um die Genauigkeit der Ergebnisse zu gewährleisten.

Creative Enzymes ist eines der wenigen Unternehmen, die Enzymaktivitätstestdienste für Carboxylat-Reduktase anbieten. Wir haben ein perfektes Quantifizierungssystem für Enzyme etabliert, die durch Sauerstoff deaktiviert werden könnten. Mit einzigartigen Techniken wie anaeroben Assays wird Creative Enzymes auch in Zukunft Ihre erste Wahl bei der Bestimmung der Enzymaktivität sein.

Abbildung: Der Carboxylat-Reduktase-Kofaktor Pyranopterin.