Messung der Enzymaktivität der Alkoholdehydrogenase (NADP+) mittels spektrophotometrischer Assays

Creative Enzymes bietet zuverlässige Aktivitätsmessungen für Aldehydreduktasen an. Die Aktivitätsassays werden auf modernsten analytischen Instrumenten mittels spektrophotometrischer Verfahren durchgeführt. Wir zeichnen uns durch kurze Durchlaufzeiten bei Standard-Aktivitätsbestimmungen ebenso wie bei kundenspezifischen Aufgabenstellungen aus.

Alkoholdehydrogenase (NADP+) (EC 1.1.1.2) ist eine Gruppe von Oxidoreduktasen, die häufig in Bakterien, Archaeen und Eukaryoten vorkommen. Das Enzym katalysiert hauptsächlich die Oxidation primärer Alkohole und wandelt diese in Aldehyde um, wobei einige Mitglieder dieser Enzymfamilie auch auf sekundäre Alkohole wirken können. Die Reaktion ist reversibel und kann durch dasselbe Enzym in Gegenrichtung katalysiert werden, sodass durch Reduktion von Aldehyden primäre Alkohole als Produkt entstehen. NADP (Nicotinamidadenindinukleotidphosphat) dient dem Enzym als Redox-Kofaktor und fungiert bei der Reduktion von Aldehyden als Elektronendonor bzw. bei der Oxidation von Alkoholen als Elektronenakzeptor. Das Enzym ist auch unter folgenden Bezeichnungen bekannt:

• NADP-Alkoholdehydrogenase;
• NADP+-Aldehydreduktase;
• NADP+-abhängige Aldehydreduktase;
• NADPH-Aldehydreduktase;
• NADPH-abhängige Aldehydreduktase;
• unspezifische Succinat-Semialdehyd-Reduktase;
• ALR 1;
• Aldehydreduktase mit niedrigem Km;
• Aldehydreduktase mit hohem Km;
• Aldehydreduktase

Das Enzym ist in zahlreichen biologischen Signal- und Stoffwechselwegen von Bedeutung, darunter Glykolyse/Gluconeogenese; Pentose- und Glucuronat-Interkonversionen; Glycerolipidstoffwechsel; Caprolactam-Abbau; Stoffwechselwege; Biosynthese sekundärer Metaboliten; mikrobieller Stoffwechsel in unterschiedlichen Umgebungen; sowie die Biosynthese von Antibiotika.

Da Alkoholdehydrogenase (NADP+) NADP als Redox-Kofaktor verwendet, kann der Fortschritt der enzymatischen Reaktion bei 340 nm überwacht werden, da NADPH dort ein UV-Absorptionsmaximum aufweist, NADP+ hingegen nicht. Daher werden spektrophotometrische Assays konventionell als primäre Methode zur Aktivitätsmessung eingesetzt. Creative Enzymes zeichnet sich nicht nur durch langjährige Erfahrung in der hochwertigen Aktivitätsbestimmung mittels spektrophotometrischer Assays aus, sondern ist auch für einen von unseren Wissenschaftlern entwickelten kolorimetrischen Assay bekannt, der spezielle Anforderungen an die Aktivitätsbestimmung adressiert, die mit konventionellen spektrophotometrischen Verfahren nicht ohne Weiteres abbildbar sind.

Alkoholdehydrogenase (NADP+) ist ein Zinkprotein. Das Zn2+-Ion ist jedoch nicht für die strukturelle Stabilität des Enzyms erforderlich. Einige dieser Enzyme, insbesondere bakterielle Vertreter, sind sehr sauerstoffempfindlich. Für bestimmte Alkoholdehydrogenasen (NADP+) wurde bei Exposition gegenüber Luft eine Halbwertszeit von 4–60 Minuten beobachtet. Im Vergleich dazu sind die Enzyme unter anaeroben Bedingungen selbst bei hohen Temperaturen, z. B. 85–95 °C, sehr stabil. Die Sauerstoffempfindlichkeit erhöht die Hürden für eine zuverlässige Messung der Enzymaktivität erheblich. Creative Enzymes hat luftdichte, nicht interferierende Aktivitätsassays entwickelt, die speziell für die Aktivitätsmessung von Alkoholdehydrogenase (NADP+) ausgelegt sind. Während des Tests bleiben die Enzyme über mehrere Stunden bis Tage hochaktiv und gewährleisten eine konsistente Performance über verschiedene Assay-Chargen hinweg.

Die führende Position von Creative Enzymes im Bereich der Enzymaktivitätsassays wird Ihre Arbeit mit Alkoholdehydrogenase (NADP+) deutlich beschleunigen. Ob Standard- oder Spezial-Alkoholdehydrogenase (NADP+), höchste Genauigkeit oder hohe Reproduzierbarkeit – wir liefern stets die passende Lösung, um die Hürden auf Ihrem Weg zum Erfolg zu überwinden.

Abbildung: Die Kristallstrukturen der porzinen und humanen Aldehydreduktase, eines Enzyms, das mit Komplikationen bei Diabetes in Verbindung gebracht wird
Referenz: El-Kabbani, O. et. al., Acta Crystallogr. Sect. D Biol. Crystallogr. 1994, 50 (6), 859.