Enzymaktivitätsmessung für Alkoholdehydrogenasen mittels spektrophotometrischer Assays

Creative Enzymes ist bekannt für seinen besonderen Service zur Messung der Aktivität von Alkoholdehydrogenasen mittels spektrophotometrischer Assays. Unsere Testergebnisse zur Aktivität sind dank jahrelanger Erfahrung in diesem Bereich äußerst genau und reproduzierbar. Mit unserer Kerntechnologie führen wir die Aktivitätsassays von Alkoholdehydrogenasen mit einer Vielzahl von Substratauswahlen für eine reine Alkoholdehydrogenase oder für ein Enzym in einer Mischung an.

Alkoholdehydrogenasen (ADH, EC 1.1.1.1) sind eine Gruppe von Dehydrogenaseenzymen, die auf primäre oder sekundäre Alkohole oder Hemiacetale wirken und diese durch Reduktion des Cofaktors NAD (Nicotinamidadenindinukleotid) in Aldehyde oder Ketone umwandeln. Alkoholdehydrogenase ist ein Zinkprotein, das in einem Dimer-Komplex mit einer Masse von 80 kDa vorliegt. Die Enzyme sind in vielen Organismen, einschließlich des Menschen, und in verschiedenen biologischen Aktivitäten zu finden, darunter Glykolyse/Gluconeogenese; Fettsäureabbau; Metabolismus von Glycin, Serin, Tyrosin, Threonin und Alpha-Linolensäure; Abbau von Chlorkohlenwasserstoffen und Chlorkohlenstoffen; Naphthalinabbau; Retinolmetabolismus; Metabolismus von Xenobiotika durch Cytochrom P450; Arzneimittelmetabolismus durch Cytochrom P450; Biosynthese von Sekundärmetaboliten; und Biosynthese von Antibiotika. Zum Beispiel dienen Alkoholdehydrogenasen bei Menschen und vielen anderen Tieren dazu, Alkohole abzubauen, um eine Vergiftung zu vermeiden. In Hefe, Pflanzen und vielen Bakterien katalysieren einige Alkoholdehydrogenasen die umgekehrte Reaktion, die Reduktion von Aldehyden und Ketonen, in Verbindung mit der Oxidation von NAD, um ständig genügend NAD+ für die Fermentation zu erzeugen. Für die große Anzahl von Reaktionen, die die Enzyme katalysieren, könnten sie auch andere Namen haben:

• Aldehydreduktase;
• Aliphatische Alkoholdehydrogenase;
• Ethanoldehydrogenase;
• NAD-abhängige Alkoholdehydrogenase;
• NAD-spezifische aromatische Alkoholdehydrogenase;
• NADH-Alkoholdehydrogenase;
• NADH-Aldehyddehydrogenase;
• Primäre Alkoholdehydrogenase;
• Hefe-Alkoholdehydrogenase.

Spektrophotometrische Assays werden häufig verwendet, um die enzymatische Aktivität von Alkoholdehydrogenasen zu quantifizieren, da die Reduktion von NAD+ zu NADH während der Oxidation von Alkoholen bequem bei 340 nm nachgewiesen werden kann. Die Substratspezifität von Alkoholdehydrogenasen kann jedoch sehr breit sein und viele primäre und sekundäre Alkohole abdecken. Zum Beispiel katalysiert das Enzym aus dem Tier, nicht jedoch aus der Hefe, auch die Oxidation von zyklischen sekundären Alkoholen. Daher könnte die herkömmliche Assay-Methode unter einigen Reaktionsbedingungen problematisch sein. Darüber hinaus könnte in einigen Fällen die einzige verfügbare Probe eine Mischung aus Alkoholdehydrogenase-Isozymen oder Alkoholdehydrogenasen mit anderen Enzymen sein, was die Aktivitätsmessung noch schwieriger macht. Creative Enzymes hat robuste Aktivitätsassays etabliert, die die Aktivität von Alkoholdehydrogenasen unter komplizierten Bedingungen, wie Rinderleberextrakten oder Fermentationslysaten, und sogar in Anwesenheit von unkonventionellen Substraten außer Ethanol genau messen. Ein tiefes Verständnis der Eigenschaften von Alkoholdehydrogenasen ermöglicht es uns, die herausforderndsten Aktivitätsmessungen zu bewältigen. Neben den traditionellen spektrophotometrischen Assays haben wir auch kolorimetrische Assays entwickelt, die spezielle Bedürfnisse wie schnelle Aktivitätsscreenings oder die Berichterstattung über die Enzymaktivität in speziellen Systemen erfüllen können.

Insgesamt ist Creative Enzymes Ihr vertrauenswürdiger Partner für die Aktivitätsmessung von Alkoholdehydrogenasen. Wir haben noch keinen unserer Kunden bei der enzymatischen Analyse von Alkoholdehydrogenase enttäuscht. Die Aktivitätsquantifizierung war noch nie so einfach, bis Sie sich für Creative Enzymes entscheiden.

Abbildung: Die Struktur des Enzyms Alkoholdehydrogenase Klasse 3, das beim Metabolismus des giftigen Formaldehyds im Menschen hilft.