Messung der Enzymaktivität von Glukokinase

Creative Enzymes ist ein weltweit führender Anbieter in der Entwicklung, Herstellung und Bereitstellung von Enzymen und enzymatischen Assays für Kunden. Unser schneller Service, exzellente Kundenbetreuung und engagierte, kundenspezifische Vorgehensweisen haben uns zum bevorzugten Lieferanten gemacht. Wir sind stolz darauf, hier die zuverlässigste Aktivitätsmessung für Glukokinase anbieten zu können.

Glukokinase (EC 2.7.1.2), eines der vier Säugetier‑Hexokinase‑Isoenzyme, ist das zentrale Enzym für die Glukosephosphorylierung in Hepatozyten und in pankreatischen Insel‑Betazellen. Glukokinase katalysiert die Bildung von Glukose‑6‑phosphat aus Glukose und ATP. Glukokinase weist im Vergleich zu anderen Hexokinasen unterschiedliche Eigenschaften auf: Erstens zeigt sie keine Produkthemmung durch Glukose‑6‑phosphat, und zweitens besitzt sie einen deutlich höheren KM‑Wert für Glukose als andere Hexokinasen (5 mM gegenüber 20–130 μM). Ein wesentlicher Aspekt der physiologischen Funktion der Glukokinase ist, dass der Wendepunkt der Kurve „Aktivität versus Glukosekonzentration“ nahe der physiologischen Glukosekonzentration liegt. Die Aktivitätsregulation steht im Zusammenhang mit dem Vorhandensein von mindestens zwei Konformationen, was zu einem allosterischen Verhalten der Glukokinase führt, obwohl es sich um ein monomeres Protein handelt. Dieses Enzym ist an verschiedenen Signal- und Stoffwechselwegen beteiligt:

• Glykolyse / Glukoneogenese
• Galaktosemetabolismus
• Stärke- und Saccharosestoffwechsel
• Aminozucker- und Nukleotidzuckerstoffwechsel
• Streptomycin‑Biosynthese
• Neomycin‑, Kanamycin‑ und Gentamicin‑Biosynthese
• Stoffwechselwege
• Biosynthese sekundärer Metaboliten
• Mikrobieller Stoffwechsel in unterschiedlichen Umgebungen
• Biosynthese von Antibiotika

Darüber hinaus spielt Glukokinase eine wichtige Rolle bei der Regulation des Glukosestoffwechsels, indem sie als Glukosesensor fungiert. Daher stellt das Enzym ein neuartiges molekulares Target für die Arzneimittelentwicklung bei Typ‑2‑Diabetes dar. Die Messung der katalytischen Aktivität der Glukokinase ist somit für alle Tests mit diesem Enzym von entscheidender Bedeutung und kann zudem die rationale Entwicklung von Aktivatoren zur Behandlung des Typ‑2‑Diabetes mellitus unterstützen.

Creative Enzymes nimmt eine Sonderstellung ein und gehört zu den wenigen Unternehmen weltweit, die gezielt Enzymaktivitätsassays entwickeln und liefern. Als zuverlässiger Lieferant ist Creative Enzymes in der Lage, präzise enzymatische Assays für Glukokinase bereitzustellen. So kann Glukokinase beispielsweise mit zwei Methoden analysiert werden, die beide auf Änderungen der optischen Dichte bei 340 nm basieren. In der ersten Methode wird die Bildung von Glukose‑6‑phosphat über die Reduktion von NADP+ mittels Glukose‑6‑phosphat‑Dehydrogenase gekoppelt. Im anderen Assay wird die ADP‑Bildung über die Oxidation von NADH mittels Pyruvatkinase und Laktatdehydrogenase gekoppelt. Eine Enzymeinheit ist definiert als die Enzymmenge, die die Bildung von 1 μM Glukose‑6‑phosphat pro Minute bei pH 7,0 und 20 °C katalysiert.

Durch das kontinuierliche Streben nach höchster Qualität hat Creative Enzymes das Vertrauen vieler Kunden gewonnen. Insgesamt verfolgt Creative Enzymes stets das Ziel maximaler Kundenzufriedenheit und verbessert fortlaufend Produkte, Dienstleistungen sowie das Qualitätsmanagementsystem.

Abbildung: Die Kristallstruktur der humanen Glukokinase.
PDB: 1V4S