Enzymaktivitätsmessung für Thymidinkinase

Creative Enzymes bietet die fortschrittlichsten spektrophotometrischen Assays zur genauen Messung der enzymatischen Aktivität der Thymidinkinase an. Wir sind in der Lage, mit unseren Kunden während des gesamten Prozesses der Lösung spezifischer Probleme, der Spiegelung von Zielprozessen und der Entwicklung neuer Methoden zusammenzuarbeiten. Die enge Zusammenarbeit mit unseren Kunden ist die Grundlage unseres unternehmerischen Erfolgs, und viele Kunden sind uns seit vielen Jahren treu.

Thymidinkinasen (EC 2.7.1.21; früher als EC 2.7.1.75 aufgeführt; TKs) sind essentielle Enzyme für den Beginn des Pyrimidin-Rettungswegs, da sie den magnesiumabhängigen Transfer der γ-Phosphatgruppe von ATP zu Thymidin (dThd) katalysieren und somit Thymidinmonophosphat (dTMP) bilden. dTMP wird von zellulären Enzymen weiter phosphoryliert zu 2'-Deoxythymidintriphosphat (dTTP), das als Substrat für die DNA-Polymerase während der Replikation dient. Daher regulieren Thymidinkinasen den dTTP-Pool und sind wichtige regulatorische Enzyme für die DNA-Biosynthese. Thymidinkinasen bei Säugetieren können in zwei Isoenzyme unterteilt werden. TK1, ein zytosolisches Enzym, hat eine enge Spezifität, phosphoryliert nur Deoxythymidin und Deoxyuridin und ist strikt zellzyklusabhängig. Die TK1-Aktivität ist in nicht teilenden Zellen niedrig oder nicht vorhanden, beginnt in späten G1-Zellen aufzutreten, steigt in der S-Phase, was eng mit der Zunahme der DNA-Synthese korreliert, und verschwindet schnell während der Mitose. Diese Schwankung ist entscheidend, um eine ausgewogene Versorgung mit dTTP für die DNA-Replikation bereitzustellen. TK2 ist ein mitochondrialer und zellzyklusunabhängiger Enzym.

Zusätzlich werden Thymidinkinasen in zwei Untergruppen gemäß ihrer Sequenz und Substratspezifität klassifiziert. Typ I Thymidinkinasen umfassen das Thymidinkinase des Herpes-simplex-Virus (HSV-TK) und das mitochondriale menschliche TK2. Die viel weiter verbreiteten Typ II Thymidinkinasen sind in den meisten Organismen zu finden: Eukaryoten, Bakterien und viele Viren wie Kuhpocken, Pocken und Vaccinia. Diese verschiedenen Viren sind wahrscheinliche Ziele für therapeutische Interventionen. Daher spielt die Thymidinkinase eine entscheidende Rolle bei der Aktivierung von Deoxynukleosid-Prodrugs, die in der antiviralen und onkologischen Chemotherapie verwendet werden. Zum Beispiel ist die Fähigkeit von Typ II TK, Prodrugs zu aktivieren, bereits für die HIV-Therapie dokumentiert.

Daher ist es wichtig, die Aktivität der Thymidinkinasen überwachen zu können, um die funktionale Bedeutung der Thymidinkinasen weiter zu verfolgen. Creative Enzymes verfügt über die volle Kapazität zuverlässiger enzymatischer Assays für Thymidinkinasen. Im Detail kann die Aktivität der Thymidinkinase durch einen gekoppelten spektrophotometrischen Assay bestimmt werden, bei dem die Produktion von ADP mit der Produktion von NADH über Pyruvatkinase/Lactatdehydrogenase-Reaktionen gekoppelt und bei 340 nm überwacht wird. Die Produkte von Creative Enzymes sind die vertrauenswürdigsten und bewährtesten auf dem globalen Markt, was zu hochwertigen Daten führt, die den Bedürfnissen der Kunden entsprechen. Mit wissenschaftlichem Know-how und technischer Unterstützung von Creative Enzymes werden Ihre Produkte eine starke Marktpräsenz haben.

Abbildung: Die Kristallstruktur der menschlichen Thymidinkinase 1.
PDB: 1XBT