Enzymaktivitätsmessung für ADP-spezifische Glukokinase

Creative Enzymes hebt sich auf dem Markt mit spezifischen, anpassbaren Aktivitätsassays hervor, die intern entwickelt wurden. Wir arbeiten eng mit unseren Kunden zusammen, um spezifische Probleme zu lösen, ihre Prozesse zu spiegeln und neue Methoden zur Quantifizierung der Enzymaktivität zu entwickeln. Unser Ziel ist es, die Kosten für Enzymassays zu senken, damit sie für alle Forscher zugänglich sind. Letztendlich heben uns die hohe Qualität und die niedrigen Kosten von anderen Wettbewerbern ab. Hier sind wir stolz darauf, den zuverlässigen enzymatischen Assay für ADP-spezifische Glukokinase anzubieten.

ATP spielt vielfältige Rollen bei der Speicherung freier Energie in biologischen Systemen. Darüber hinaus fungiert ATP auch als Phosphorylspender in Kinase-Reaktionen. ATP-abhängige Hexokinase katalysiert die Phosphorylierung von Glukose, wobei ATP als Phosphorylspender verwendet wird. Alle bekannten ATP-abhängigen Hexokinasen, die aus einer Vielzahl von Organismen isoliert wurden, wie Mensch, Hefe und Schistosoma mansoni, sind hochgradig verwandt. ADP-spezifische Glukokinasen haben gezeigt, dass sie die Phosphorylierung von Glukose unter Verwendung von ADP als Phosphorylspender katalysieren. ADP-spezifische Glukokinasen sind als homodimerische (Pyrococcus furiosus) oder monomerische (Thermococcus litoralis) Proteine konstruiert und sind hochspezifisch für ADP und Glukose.

Die Anwesenheit von ADP-spezifischen Kinasen bringt zwei Hauptvorteile für ein lebendes System mit sich: Zum einen zeigt ADP eine höhere Thermostabilität als ATP, insbesondere in Gegenwart von zweiwertigen Kationen (wie Mg²⁺, Ca²⁺ und Zn²⁺); zum anderen bieten anabole Reaktionen, die ADP produzieren, ein Substrat für ADP-abhängige Kinasen und fördern die Aktivierung von Zuckern unter Bedingungen mit niedriger Energiebeladung. ADP-spezifische Glukokinasen und Phosphofruktokinasen aus einem hyperthermophilen Archaeon wurden als homolog befunden und bilden eine neuartige Gruppe von Kinasen. Da bis heute keine anderen Kinasen bekannt sind, die ADP verwenden, ist diese neuartige Kinasegruppe ein sehr seltenes Modell, das Licht auf den evolutionären Ursprung von Kinasen werfen kann. Daher ziehen diese Enzyme ein immer wachsendes Interesse auf sich, um in der Studie der enzymatischen Evolution verwendet zu werden.

Aufgrund der Spezifität dieses Enzyms selbst sind Aktivitätsassays von ADP- spezifischen Glukokinasen unter Verwendung von spektrophotometrischen Assays im industriellen Maßstab nicht gut etabliert. Allerdings hat sich der spektrophotometrische Assay als die zuverlässigste und kosteneffektivste Methode zur Aktivitätsquantifizierung dieses Enzyms erwiesen. Glücklicherweise ist Creative Enzymes zuversichtlich, die fortschrittlichsten spektrophotometrischen Instrumente anzubieten, um die enzymatische Aktivität der ADP-spezifischen Glukokinase genau zu messen. Zum Beispiel wird die ADP-spezifische Glukokinase durch einen gekoppelten Assay mit Hefe-Glukose-6-Phosphat-Dehydrogenase gemessen, der die Bildung von NADPH misst. Der Assay wird bei 50 °C durchgeführt. Bei dieser Temperatur bleibt das Hefenenzym aktiv, und die ADP-spezifische Glukokinase ist ausreichend aktiv, um ihre Aktivität zu messen. Die Absorption von NADPH wird bei 334 nm verfolgt.

Creative Enzymes ist ein globaler Marktführer in der Entwicklung, Optimierung und Bereitstellung von bioanalytischen Dienstleistungen und enzymatischen Assays für die Kunden. Unser schneller Service, die beste Kundenbetreuung und engagierte Ansätze haben uns zum bevorzugtesten Anbieter gegenüber unseren Wettbewerbern gemacht.

Abbildung: Die Kristallstruktur der ADP-spezifischen Glukokinase von T. litoralis.
PDB: 4B8R