Messung der Enzymaktivität der Diphosphat-Fructose-6-Phosphat-1-Phosphotransferase

Die aktuellen Erfolge von Creative Enzymes basieren auf spezialisierten Enzymologen, modernster Ausstattung und professionell etablierten Betriebsabläufen. In den vergangenen Jahren wurden umfangreiche experimentelle Erfahrungen aufgebaut. Ein umfassendes Verständnis sowie standardisierte Arbeitsprozesse gewährleisten geeignete Assay-Methoden und belastbare, reproduzierbare Ergebnisse. Der chromatographische Assay zur Aktivitätsbestimmung der Diphosphat‑Fructose‑6‑phosphat‑1‑Phosphotransferase zählt zu unseren fortschrittlichen Dienstleistungen.

Die Diphosphat‑Fructose‑6‑phosphat‑1‑Phosphotransferase (EC 2.7.1.90, PFK) katalysiert die reversible Umwandlung von Fructose‑6‑phosphat und Fructose‑1,6‑bisphosphat unter Verwendung von anorganischem Pyrophosphat (PPi) anstelle von ATP als Phosphatgruppendonor. Für die katalytische Aktivität ist die Beteiligung zweiwertiger Kationen erforderlich, wobei Mg²⁺ am häufigsten eingesetzt wird. Darüber hinaus können auch Mn²⁺ und Co²⁺ an den Reaktionen beteiligt sein. Dieses Enzym wurde in höheren Pflanzen, primitiven Eukaryoten, Bakterien und Archaeen beschrieben.

Die Diphosphat‑Fructose‑6‑phosphat‑1‑Phosphotransferase ist am Glykolyseweg beteiligt und stellt den wesentlichen Regulator des Flussdurchsatzes dieses Stoffwechselwegs dar. Die Nutzung des PPi‑abhängigen Enzyms in der Glykolyse reduziert den ATP‑Verbrauch und stellt mehr ATP für zelluläre Prozesse zur Verfügung, z. B. für die Bildung biosynthetischer Vorstufen und die Aufrechterhaltung eines transmembranen Protonengradienten. Dieses Enzym ist zudem an der Kohlenhydratverwertung beteiligt, etwa am Fructose‑ und Mannose‑Stoffwechsel. Damit ist das Enzym essenziell, um eine maximale Nutzung von Energie und Ressourcen zu erreichen. Zunehmend fokussieren Studien auf strukturelle Untersuchungen, die Hinweise auf Ursprung und Evolution dieser bemerkenswerten Enzymfamilie liefern können. Datensätze deuten darauf hin, dass dieses Enzym wahrscheinlich aus einer ancestralen ATP‑abhängigen PFK hervorgegangen ist und später in Pflanzen zusätzliche Eigenschaften erworben hat. In Verbindung mit ortsgerichteter Mutagenese ermöglicht die Quantifizierung der Enzymaktivität Einblicke in den katalytischen Mechanismus. Zu diesem Zweck bietet Creative Enzymes hochwertige Assay‑Services an, um zur Aufklärung von Ursprung und Mechanismus des Enzyms beizutragen.

Abbildung: Die Kristallstruktur einer pyrophosphatabhängigen Phosphofructokinase aus der Lyme‑Borreliose‑Spirochäte Borrelia burgdorferi.
Referenz: Moore, S.A. et al. Structure 2002 10: 659–671.

Creative Enzymes setzt sich kontinuierlich dafür ein, erstklassige Dienstleistungen zur Messung der Enzymaktivität bereitzustellen. Wir verfügen über die Kompetenz, für jede Prüfsituation geeignete Ansätze für Aktivitätstests zu konzipieren. Nach der Durchführung einer Vielzahl von Assays sind unsere Kunden mit den Ergebnissen und der Servicequalität zufrieden. Creative Enzymes wird sein Fachwissen fortlaufend aktualisieren und die Geräteausstattung weiter modernisieren, um Enzymaktivitätsmessungen noch effizienter und zuverlässiger durchzuführen.