Messung der Enzymaktivität der Pyruvatkinase

Creative Enzymes ist der erfahrenste Dienstleister, der auf die Analyse der Enzymaktivität spezialisiert ist. Unter Einsatz modernster Technologien und fortschrittlicher Geräte ist Creative Enzymes in der Lage, sämtliche Anfragen zu bearbeiten und dabei technische Unterstützung sowie maßgeschneiderte Services zu bieten, die in der Branche ihresgleichen suchen. Im Folgenden stellt Creative Enzymes gerne den präzisesten enzymatischen Assay für Pyruvatkinase bereit.

Pyruvatkinase (EC 2.7.1.40; ATP:Pyruvat-2-O-Phosphotransferase) katalysiert den letzten Schritt der Glykolyse und erzeugt dabei das zweite der zwei ATP-Moleküle, die im glykolytischen Stoffwechselweg gebildet werden. Dieses Enzym katalysiert die irreversible Phosphorylierung von ADP auf Kosten von Phosphoenolpyruvat (PEP) unter Bildung von Pyruvat und ATP. Diese Reaktion ist ein Schlüsselschritt, der entweder zur anaeroben Fermentation oder zur oxidativen Phosphorylierung von Pyruvat führt, und dient als wesentlicher Regulator der Glykolyse. Zu beachten ist, dass die allosterische Regulation dieser Enzymaktivität durch verschiedene phosphorylierte Zucker eine zentrale Rolle bei der Aufrechterhaltung eines angemessenen Gleichgewichts intrazellulärer Substrat- und Produktkonzentrationen spielt. Somit ist die Regulation der Pyruvatkinase entscheidend für die Kontrolle der ATP-, GTP- und glykolytischen Intermediatspiegel in der Zelle. Darüber hinaus kann Pyruvatkinase auch als Schalter zwischen glykolytischen und gluconeogenetischen Stoffwechselwegen fungieren. Nahezu alle Pyruvatkinasen liegen als homotetrameres Protein mit Untereinheiten von 50–60 kDa vor. Bei Säugetieren lässt sich Pyruvatkinase in vier Isoenzyme (L, R, M1 und M2) unterteilen. Jedes Isoenzym weist unterschiedliche kinetische Eigenschaften auf, die den spezifischen metabolischen Anforderungen des exprimierenden Gewebes entsprechen.

Pyruvatkinase spielt eine zentrale Rolle in Diagnostik, Medizin und Arzneimittelentwicklung. So führen genetische Defekte der Pyruvatkinase zu der als Pyruvatkinase-Mangel bekannten Erkrankung. Darüber hinaus ist M₂-Pyruvatkinase im Stuhl ein Screeningmarker für kolorektales Karzinom, und M₂-Pyruvatkinase im Plasma ist ebenfalls ein Marker für Verlaufsuntersuchungen während der Tumortherapie. M2-Pyruvatkinase kann somit auch ein potenziell attraktives Arzneimittelziel (Drug Target) darstellen. Daher ist die Quantifizierung der enzymatischen Aktivität der Pyruvatkinase entscheidend, um ihre Mechanismen zu verstehen, und liefert zudem wichtige Hinweise für das Design potenzieller neuer Arzneistoffe zur Tumortherapie. Creative Enzymes ist in der Lage, einen präzisen Aktivitätsassay für Pyruvatkinase bereitzustellen. Die Pyruvatkinase-Reaktion kann an die Lactatdehydrogenase-Reaktion gekoppelt und mittels spektrophotometrischer Überwachung der Oxidation von NADH bei 340 nm bestimmt werden. Dank modernster spektrophotometrischer Instrumentierung, führender Technologie und eines professionellen Forschungsteams wird die Aktivitätsmessung der Pyruvatkinase zuverlässig und zeitnah gewährleistet. Durch jahrelange Forschung und Entwicklung hat sich Creative Enzymes als weltweit führender Anbieter im Bereich enzymatischer Assays etabliert. Unsere hochwertigen Enzymassay-Services werden von immer mehr Kunden anerkannt. Insgesamt freut sich Creative Enzymes darauf, Sie in jeder Phase Ihrer Forschung als Partner zu begleiten.

Abbildung: Die Kristallstruktur der humanen M2-Pyruvatkinase.
PDB: 3SRH