Enzymaktivitätsmessung für Shikimatdehydrogenase mittels spektrophotometrischer Assays

Creative Enzymes ist seit Jahren ein führendes Unternehmen in der Enzymaktivitätsbestimmung. Wir bieten die schnelle Aktivitätsmessung in industriellen Maßstäben und tiefgehend angepasste Aktivitätsassays für spezielle Anforderungen an. Das erstklassige Team ist auf die Aktivitätsmessung von Oxidoreduktasen spezialisiert, einschließlich Shikimat-Dehydrogenase, unter Verwendung von Spektrophotometrie.

Shikimat-Dehydrogenase (EC 1.1.1.25) katalysiert die reversible NADPH-abhängige Reduktion von 3-Dehydroshikimat zu Shikimat. Das Enzym reduziert die Kohlenstoff-Sauerstoff-Doppelbindung einer Carbonylgruppe zu einer Hydroxylgruppe, während das Cofaktor NADPH zu NADP+ oxidiert wird. Dieses Enzym ist an der Biosynthese von Phenylalanin, Tyrosin und Tryptophan beteiligt und wirkt in einem Schritt des Shikimat-Weges. Dieser Weg ist essentiell in Bakterien, Pflanzen, Pilzen, Algen und Parasiten und verantwortlich für die Biosynthese von aromatischen Aminosäuren wie Phenylalanin, Tyrosin und Tryptophan aus dem Metabolismus von Kohlenhydraten. Im Gegensatz dazu ist der Shikimat-Weg bei Tieren und Menschen nicht vorhanden. Daher sind die drei aromatischen Aminosäuren essentielle Aminosäuren, die über die Nahrung aufgenommen werden müssen. Der systematische Name dieser Enzymklasse ist Shikimat:NADP+ 3-Oxidoreduktase, und es ist auch bekannt als:

• Dehydroshikimatreduktase,
• Shikimat-Oxidoreduktase,
• Shikimat:NADP+ Oxidoreduktase,
• 5-Dehydroshikimatreduktase,
• Shikimat 5-Dehydrogenase,
• 5-Dehydroshikimatreduktase,
• DHS-Reduktase,
• Shikimat:NADP+ 5-Oxidoreduktase
• AroE.

Da der Shikimat-Weg bei Menschen oder Tieren nicht vorhanden ist, wird er als vielversprechendes Ziel für Herbizide und antimikrobielle Mittel identifiziert. Studien zur Shikimat-Dehydrogenase sind ein aufkommendes Thema, da immer mehr Herbizide und Antibiotika an Wirksamkeit aufgrund wachsender Resistenzen verlieren. Darüber hinaus ist es auch wichtig, die Vielfalt der blockierten Enzyme in einem Weg aufrechtzuerhalten, um höhere Bakterientötungsraten zu erreichen. Angesichts der düsteren Aussichten der aktuellen antimikrobiellen Behandlung wächst die Nachfrage nach potenten und ungiftigen Inhibitoren der Shikimat-Dehydrogenase weiter. Obwohl der Aktivitätstest der Shikimat-Dehydrogenase bereits zuvor berichtet wurde, ist der Assay nie einfach durchzuführen. Die Instabilität seiner Substrate und die Anfälligkeit für Störungen durch andere Enzyme machen die Aufgabe schwierig. Creative Enzymes überwindet all diese Hürden mit der Unterstützung des Wissenschaftlerteams und modernster Instrumente. Die enzymatische Aktivität kann genau überwacht werden, egal in welche Reaktionsrichtung, durch Änderungen der NADPH-Konzentrationen, indem die Absorptionsintensität bei 340 nm gemessen wird.

Creative Enzymes freut sich, Ihnen die neuesten Aktivitätsassays für Shikimat-Dehydrogenase anzubieten und ist bereit, mit Ihnen auf den Erfolg hinzuarbeiten. Egal, ob Sie in der pharmazeutischen, landwirtschaftlichen oder veterinärmedizinischen Industrie tätig sind, wir sind immer bereit, qualitativ hochwertige Aktivitätsergebnisse zu liefern.

Abbildung: Die Kristallstruktur der Shikimat-Dehydrogenase, die die einzigartige Bindungsschleife (grün) für NADPH (gelb) zeigt.
Referenz: Ye, S. et. al., A. J. Bacteriol. 2003, 185 (14), 4144.