Messung der Enzymaktivität der Sulfat-Adenylyltransferase

Creative Enzymes ist auf die Messung von Enzymaktivitäten spezialisiert. Durch jahrelange Prüfung verschiedenster Enzyme sowie die Entwicklung neuer Methoden hat Creative Enzymes umfassende Expertise aufgebaut, die Aktivitätsassay-Services in höchster Qualität ermöglicht. Unter den Enzymtestdienstleistungen zählt die Aktivitätsbestimmung der Sulfat-Adenylyltransferase zu den am häufigsten nachgefragten Leistungen.

Die Sulfat-Adenylyltransferase (EC 2.7.7.4) ist ein Enzym, das die Übertragung der Adenylylgruppe von ATP auf anorganisches Sulfat katalysiert und dabei Adenosin-5’-phosphosulfat (APS) sowie Pyrophosphat (PPi) bildet. Diese Reaktion erzeugt eine energiereiche Phosphorsäure-Schwefelsäure-Anhydridbindung, die den Schwefelassimilationsweg antreibt. Die Sulfat-Adenylyltransferase ist in der Natur weit verbreitet und wurde in nahezu allen Organismengruppen nachgewiesen. Ihre physiologischen Funktionen unterscheiden sich jedoch je nach metabolischem Lebensstil der Organismen. In vielen Eukaryoten und Bakterien fungiert die Sulfat-Adenylyltransferase als erstes Enzym in einer Proteinkaskade, die anorganisches Sulfat (SO₄^2-) aktiviert und in organische Verbindungen einbaut. Das durch die Sulfat-Adenylyltransferase gebildete APS wird anschließend an der 3’-Position phosphoryliert, wodurch 3’-Phosphoadenosin-5’-phosphosulfat (PAPS) entsteht. In den meisten pflanzlichen und mikrobiellen Zellen liegen Sulfat-Adenylyltransferase und APS-Kinase als separate Proteine vor. Tiere und einige Bakterien verfügen hingegen über eine „PAPS-Synthetase“, in der die Aktivitäten dieser beiden sulfataktivierenden Enzyme auf einer einzelnen Polypeptidkette vereint sind.

Die Sulfat-Adenylyltransferase spielt in der Natur eine Schlüsselrolle. Erstens katalysiert dieses Enzym in Pilzen, Hefen, den meisten heterotrophen Bakterien, Algen und höheren Pflanzen die erste intrazelluläre Reaktion der reduktiven Assimilation von anorganischem Sulfat in organische Moleküle (z. B. Cystein, Methionin). Zweitens wird APS in anaeroben sulfatreduzierenden Bakterien (z. B. Desulfovibrio) ausschließlich gebildet, um als terminaler Elektronenakzeptor des heterotrophen Stoffwechsels zu dienen. Drittens katalysiert die Sulfat-Adenylyltransferase in bestimmten chemo- und photolithotrophen Bakterien (z. B. Aquifex, Thiobacillus) die letzte Reaktion bei der Oxidation reduzierter anorganischer Schwefelverbindungen zu Sulfat. Daher ist hervorzuheben, dass die Sulfat-Adenylyltransferase aufgrund ihrer vielfältigen und bedeutenden Funktionen zunehmend in den Fokus rückt.

Abbildung: Die Kristallstruktur der Sulfat-Adenylyltransferase aus Saccharomyces cerevisiae.
PDB: 1G8F

Creative Enzymes ist in der Lage, einen zuverlässigen enzymatischen Assay für Sulfat-Adenylyltransferase schnell und präzise durchzuführen. Die Aktivität der Sulfat-Adenylyltransferase wird mittels kontinuierlichem spektrophotometrischem Assay unter Verwendung einer gekoppelten Lactatdehydrogenase-/Pyruvatkinase-Methode bestimmt. Dabei wird das Reaktionsprodukt über die Kopplung seiner Bildung an die Oxidation von NADH in Gegenwart von Phosphoenolpyruvat, Pyruvatkinase, Lactatdehydrogenase und NADH quantifiziert. Die Abnahme der Absorption bei 340 nm wird spektrophotometrisch überwacht. Bitte beachten Sie, dass die enzymatischen Assays von Creative Enzymes weltweit zu den vertrauenswürdigsten und am besten validierten zählen und dadurch hochwertige Services mit einer hohen Wiederbeauftragungsrate ermöglichen. Creative Enzymes fühlt sich geehrt, Ihr verlässlicher Partner zu sein.