Messung der Enzymaktivität der ungesättigten Rhamnogalacturonyl-Hydrolase

Creative Enzymes ist ein führender Anbieter hochwertiger bioanalytischer Dienstleistungen. Wir bieten maßgeschneiderte Auftragsforschung mit Spezialisierung auf Enzymaktivitätsmessungen, wie z. B. den spektrophotometrischen Aktivitätsassay für ungesättigte Rhamnogalacturonylhydrolase. Aufgrund der erst kürzlich erfolgten Entdeckung und Identifizierung dieses Enzyms liegen bislang nur wenige Untersuchungen zu seinem kinetischen Verhalten und seiner Struktur vor. Eine valide Aktivitätsbestimmung ist ohne die oben genannten Informationen entsprechend anspruchsvoll. Creative Enzymes stützt sich jedoch auf ein exzellentes Expertenteam und hat robuste Aktivitätsanalysen entwickelt, um die Anforderungen unserer Kunden zuverlässig zu erfüllen.

Ungesättigte Rhamnogalacturonylhydrolase (EC 3.2.1.172, YesR) wurde kürzlich aus Bacillus subtilis identifiziert und anhand ihrer Enzymeigenschaften einer neuen Familie der Glykosidhydrolasen 105 (GH-105) zugeordnet. YesR wirkt spezifisch auf ungesättigtes Rhamnogalacturonan (RG) und setzt aus dem Substrat ΔGalA frei. Es wird vermutet, dass das Enzym in Bakterien und Pilzen konserviert ist. Seine dreidimensionale Struktur ist bislang nicht abschließend geklärt.

Rhamnogalacturonan (RG) ähnelt dem verzweigten Bereich von Pektin, dem komplexesten Polysaccharid der pflanzlichen Zellwand. Pflanzliche Zellwände sind entscheidend für die Aufrechterhaltung der Zellform, den Nährstofftransport, den Export von Toxinen und Metaboliten sowie die Abwehr mikrobieller Pathogene. Zellwandabbauende Enzyme sind für mikrobielle Pathogene essenziell, um in Pflanzenzellen einzudringen. Viele phytopathogene Bakterien produzieren Enzyme, die für den Abbau von RG-I, der Hauptkette des Rhamnogalacturonans, verantwortlich sind. Das Enterobakterium Erwinia chrysanthemi, ein typischer Vertreter pflanzlicher Pathogene, verursacht Weichfäule-Erkrankungen und produziert verschiedene Typen RG-I-assoziierter Enzyme, darunter auch die ungesättigte Rhamnogalacturonylhydrolase. Aufgrund ihrer spezifischen Aktivität besitzt die ungesättigte Rhamnogalacturonylhydrolase ein hohes Potenzial für die Lebensmittelverarbeitung, die Biomassenutzung sowie agrarwirtschaftliche Anwendungen – entweder als Katalysator oder als potenzielles Target zur Bekämpfung pflanzlicher Pathogene. Entsprechend wird ein rasches Wachstum des zukünftigen Marktes für dieses Enzym erwartet. Ein standardisierter Aktivitätsassay für dieses Enzym ist jedoch bislang nicht etabliert.

Abbildung 1: Vorgeschlagener katalytischer Reaktionsmechanismus von YteR.
Referenz: Itoh T, Ochiai A, Mikami B, et al. Biochemical and biophysical research communications, 2006, 347(4): 1021-1029.

Creative Enzymes ist stolz darauf, einen präzisen enzymatischen Aktivitätsassay für ungesättigte Rhamnogalacturonylhydrolase bereitzustellen. Die Enzymaktivität wird durch Monitoring der Abnahme der Absorption bei 235 nm bestimmt; dies korreliert mit dem Verlust der C=C-Doppelbindung des Substrats. Unsere Testergebnisse genießen das Vertrauen von Tausenden Kunden, die unsere Leistungen seit vielen Jahren in Anspruch nehmen. Mit einer langen Historie in Forschung und Entwicklung hat Creative Enzymes umfassende Expertise aufgebaut und sich als erste Wahl für Enzymaktivitätsmessungen etabliert.

Abbildung 2: Kristallstruktur des YteR-Proteins aus Bacillus subtilis.
PDB: 1NC5