Messung der Enzymaktivität von Alpha,Alpha-Phosphotrehalase

Als zuverlässiger Lieferant bietet Creative Enzymes exzellente und kosteneffiziente Dienstleistungen mit klaren Wettbewerbsvorteilen gegenüber anderen Anbietern. Zu den Highlights unseres Serviceportfolios zählen innovative Testmethoden, kurze Durchlaufzeiten, umfassende Erfahrung sowie spezialisierte Analytik. Als industrielles Biotechnologieunternehmen kann Creative Enzymes Enzymaktivitätsassays zur Unterstützung verschiedenster Forschungsprojekte bereitstellen. Im Folgenden bieten wir die Aktivitätsbestimmung für Alpha,Alpha-Phosphotrehalase an.

Alpha,Alpha-Phosphotrehalase (EC 3.2.1.93) wird durch treA kodiert und ist ein Mitglied der GH13-Familie. Dieses Enzym katalysiert die Spaltung der Alpha,Alpha-1,1-glykosidischen Bindung von Trehalose-6-phosphat unter Bildung von Glukose und Glukose-6-phosphat. Die freie Glukose wird anschließend weiter phosphoryliert zum zweiten Molekül Glukose-6-phosphat; beide Glukose-6-phosphat-Einheiten treten danach in die Glykolyse ein und liefern Energie für Zellwachstum und Proliferation. Dieses Enzym ist ein Schlüsselfaktor für die Nutzung von Trehalose als alleinige Kohlenstoffquelle. Trehalose ist ein nicht reduzierendes Disaccharid, das in einer Vielzahl lebender Organismen vorkommt. Mit Ausnahme der Wirbeltiere ist dieser Zucker in nahezu allen anderen Organismen verbreitet, einschließlich Bakterien, Pilzen, Protozoen und Pflanzen, wo er als Energiespeicher oder zur Synthese zellulärer Komponenten dienen kann. Darüber hinaus wurde gezeigt, dass Trehalose Proteine und Zellmembranen vor Inaktivierung oder Denaturierung schützt, die durch Austrocknung, Dehydrierung, Hitze, Kälte und Oxidation verursacht werden. In Kombination mit dem Phosphotransferase-System (PTS) wird Trehalose in Zellen transportiert und dient als Energiequelle. Bislang wurde lediglich die Kristallstruktur der Alpha,Alpha-Phosphotrehalase aus Bacillus licheniformis identifiziert. Forschende versuchen, Strukturen des Enzyms aus weiteren Quellen zu gewinnen, um die molekulare Grundlage der Katalyse besser zu verstehen. Daher werden auch zentrale Informationen zur Kinetik der Katalyse benötigt, um den katalytischen Prozess aufzuklären, und präzise Aktivitätsassays sind für solche Untersuchungen essenziell. Creative Enzymes führt zuverlässige spektrophotometrische Assays durch, die gegenüber anderen Methoden eine hohe Effizienz und Genauigkeit aufweisen. Das Prinzip dieser Methode basiert auf dem Nachweis der freigesetzten Glukose mittels Kopplung an Oxidationsreaktionen.

Abbildung: Die Kristallstruktur der Trehalose-6-phosphat-Hydrolase (TreA) aus Bacillus licheniformis, Mutante R201Q, im Komplex mit PNG.
Referenz: Lin, M.-G. et al. Acta Crystallogr D Struct Biol 2016 72: 59-70.

Creative Enzymes gehört zu den wenigen Unternehmen, die Dienstleistungen zur Aktivitätsbestimmung für Alpha,Alpha-Phosphotrehalase anbieten können. Die geeigneten Assay-Methoden basieren auf umfassender Kenntnis der Enzymeigenschaften. Gestützt auf unsere standardisierten Abläufe sowie unser Qualitätsmanagement unterliegt jeder Test einer strengen Kontrolle und weist eine hohe Reproduzierbarkeit auf. Insgesamt ist Creative Enzymes die beste Wahl für die Auftragsforschung im Bereich Enzyme.