Messung der Enzymaktivität von Cellulose-1,4-β-Cellobiosidase (reduzierendes Ende)

Die Enzym-Assay-Services von Creative Enzymes zeichnen sich durch hohe Qualität und kurze Bearbeitungszeiten aus. Durch die Kombination modernster Geräte mit fortschrittlichen Methoden hat Creative Enzymes Enzymaktivitätsassays etabliert, die sowohl industrielle als auch wissenschaftliche Anforderungen erfüllen. Wir sind auf die Prüfung von Hydrolasen spezialisiert, darunter Cellulose-1,4-β-Cellobiosidase (reduzierendes Ende).

Cellulose-1,4-β-Cellobiosidase (reduzierendes Ende) (Cellobiohydrolase, EC 3.2.1.176) hydrolysiert eine β-1,4-glykosidische Bindung vom reduzierenden Ende der Cellulose und setzt als Hauptprodukt Cellobiose frei. Der hydrolytische Abbau von Polysacchariden ist ein biologischer Prozess mit vielversprechenden industriellen Anwendungen; hierfür werden jedoch neben Cellobiohydrolasen drei weitere Cellulasen benötigt. Diese spezialisierten Enzyme können unabhängig sekretiert werden oder sind bei einigen Organismen an der Bildung des Cellulosoms beteiligt – eines Proteinkomplexes, der eine Vielzahl hydrolytischer Enzyme umfasst, die koordiniert zusammenwirken, um Cellulose effizient abzubauen.

Cellobiohydrolasen wurden in den Glycosid-Hydrolase-Familien 7 (GH7) und 48 (GH48) identifiziert. GH7-Cellobiohydrolasen weisen eine Jelly-Roll-β-Sandwich-Faltung auf und nutzen zwei katalytische Glutamate in einem retinierenden hydrolytischen Mechanismus. Enzyme der GH48-Familie werden überwiegend als (α/α)₆-Faltungsenzyme klassifiziert und können Aspartat bzw. Glutamat als Base bzw. Säuredonor für die Substratspaltung verwenden; die Freisetzung von Cellobiose als Hauptprodukt erfolgt dabei über einen invertierenden Mechanismus. Angesichts der Anwendungen in der Biokatalyse, der chemischen Synthese und der Umweltchemie werden zunehmend Varianten dieses Enzyms entwickelt, einschließlich der Erstellung diverser Mutantenbibliotheken sowie der Optimierung der Zusammensetzung von Enzymmischungen zur Hydrolyse von Biomasse. Entsprechend steigt der Bedarf an Aktivitätsmessungen von Cellobiohydrolasen. Der Assay wird üblicherweise durch Nachweis der Hydrolyseprodukte (Cellobiose oder Glucose) im Überstand mittels HPLC durchgeführt. Die leistungsstarke Chromatographie von Creative Enzymes ermöglicht schnelle und zugleich präzise Ergebnisse für unterschiedliche Testanforderungen.

Abbildung: Kristallstruktur und katalytischer Mechanismus der Cellobiohydrolase CelS.
Referenz: Guimaraes, B.G. et al. J.Mol.Biol. 2002 320: 587-596.

Creative Enzymes zählt zu den führenden Unternehmen mit Fokus auf Enzym-Services. Darüber hinaus sind wir das einzige Unternehmen, das Assay-Services für Cellulose-1,4-β-Cellobiosidase (reduzierendes Ende) anbietet. Unsere erfahrenen Enzymologen wählen für jede individuelle Anfrage stets die am besten geeignete Assay-Methode aus. Die kontinuierliche Optimierung unseres Aktivitätsassay-Services ist unser oberstes Ziel; hierfür wird Creative Enzymes sein Fachwissen und seine Kompetenzen fortlaufend erweitern und aktualisieren.