Messung der Enzymaktivität der Guanylatkinase

Creative Enzymes ist ein führender Anbieter hochwertiger bioanalytischer Dienstleistungen und maßgeschneiderter Auftragsforschung mit Spezialisierung auf Enzymaktivitätsanalysen. Wir erfüllen die Anforderungen zahlreicher Kunden aus der pharmazeutischen, biotechnologischen und diagnostischen Industrie. Ausgestattet mit modernsten spektrophotometrischen Instrumenten gewährleistet Creative Enzymes die professionelle und fristgerechte Durchführung seiner Tests. Im Folgenden bieten wir einen schnellen und präzisen Aktivitätsassay für Guanylatkinase an.

Guanylatkinase (EC 2.7.4.8; ATP:(d)GMP-Phosphotransferase) katalysiert die reversible Phosphorylierung von GMP bzw. dGMP zu GDP bzw. dGDP. Guanylatkinase ist essenziell für die Umwandlung von GMP zu GDP und damit für die Synthese von GTP. Dieses Enzym ist zudem am Recycling von cGMP beteiligt; diese Aktivität gilt als regulierend für die Bereitstellung von Guanosin-Nukleotiden für Komponenten von Signaltransduktionswegen, wie cGMP, GMP, GDP und GTP. Als Schlüsselenzym des Nukleotidstoffwechsels ist Guanylatkinase ein Target für antineoplastische Wirkstoffe. Darüber hinaus wird dieses Enzym durch das potente Antitumor-Arzneimittel 6‑Thioguanin inhibiert. Ferner steht Guanylatkinase in Zusammenhang mit potenzieller antiviraler Aktivität in virusinfizierten Zellen. So erfolgt beispielsweise die Aktivierung der Guanosin-Analoga Aciclovir und Ganciclovir nach einem ersten Phosphorylierungsschritt durch die virale Herpes-Thymidinkinase durch Guanylatkinase.

Aufgrund der zentralen Rolle, die Guanylatkinase bei der Aktivierung antiviraler und antineoplastischer Arzneistoffe spielt, ist die Überwachung der Enzymaktivität von erheblicher Bedeutung. Die Aktivitätsmessung kann anspruchsvoll sein, liefert jedoch wichtige Erkenntnisse für das Design neuer Wirkstoffe als therapeutische Lösungen. Creative Enzymes ist bestens aufgestellt, um den präzisesten Enzymaktivitätsassay für Guanylatkinase bereitzustellen. Creative Enzymes verfügt über modernste Technologie, fundiertes Fachwissen und aktuelle Geräteausstattung, die Ihre Forschung in herausragender Weise unterstützen kann. Im Detail wird die Aktivität der Guanylatkinase mittels eines gekoppelten Lactatdehydrogenase-/Pyruvatkinase-Verfahrens bestimmt. Dabei wird das Reaktionsprodukt quantifiziert, indem seine Bildung an die Oxidation von NADH in Gegenwart nicht limitierender Konzentrationen von Phosphoenolpyruvat, Pyruvatkinase, Lactatdehydrogenase und NADH gekoppelt wird. Die Abnahme der Absorption bei 340 nm wird spektrophotometrisch überwacht.

Mit jahrelanger Expertise in der Enzymologie hat sich Creative Enzymes zu einem weltweit führenden Anbieter von Enzymassays entwickelt. Wir können gemeinsam mit unseren Kunden den gesamten Prozess begleiten, um komplexe Fragestellungen zu lösen oder Abläufe zu optimieren. Die enge Zusammenarbeit mit Kunden ist für die Methodenentwicklung aufgrund der technischen Besonderheiten von Enzymen von großer Bedeutung. Bis heute hat diese Strategie Creative Enzymes Tausende treue Kunden eingebracht, und wir freuen uns darauf, in naher Zukunft mit Ihnen zusammenzuarbeiten.

Abbildung: Die Kristallstruktur der oligomeren E. coli-Guanylatkinase im Komplex mit GMP.
PDB: 2ANB