Messung der Enzymaktivität der Nukleosid-Diphosphat-Kinase

Creative Enzymes ist ein weltweit führendes Unternehmen, das auf die Entwicklung, Optimierung und Bereitstellung analytischer Dienstleistungen spezialisiert ist. Creative Enzymes ist auf dem globalen Markt hervorragend etabliert und entwickelt innovative Enzymaktivitätsassays, die mit modernsten Instrumenten durchgeführt werden. Erstklassiger technischer Support und ein individuell ausgerichteter Kundenservice gehören zu den Spitzenleistungen der Branche. Im Folgenden bieten wir Ihnen einen zuverlässigen Enzymaktivitätsassay für Nukleosid-Diphosphat-Kinase an.

Die Familie der Nukleosid-Diphosphat-Kinasen (EC 2.7.4.6; ATP:Nukleosid-Diphosphat-Phosphotransferase) umfasst eine spezifische Gruppe ubiquitärer Housekeeping-Phosphotransferasen. Sie sind an der Aufrechterhaltung des intrazellulären Pools an Nukleosidtriphosphaten (NTPs) beteiligt, die für die Biosynthese erforderlich sind, indem sie die nicht substratspezifische Umwandlung von Nukleosiddiphosphaten (NDP) zu NTP katalysieren. Insbesondere katalysiert die Nukleosid-Diphosphat-Kinase den reversiblen Transfer einer terminalen γ-Phosphorylgruppe (P) von NTP auf NDP unter Beteiligung eines energiereichen, phosphorylierten und konservierten Histidinrests (His) als Zwischenprodukt, über einen Ping-Pong-Mechanismus. Nukleosid-Diphosphat-Kinasen wurden aus verschiedenen Organismen und Zelltypen isoliert, darunter Prokaryoten, niedere und höhere Eukaryoten sowie Maus, Ratte und Mensch. Sie sind ubiquitär verteilt, insbesondere im Zellkern, im Zytoplasma in Assoziation mit Mikrotubuli, an der Zelloberfläche, in den Mitochondrien und in der extrazellulären Flüssigkeit. Eukaryotische Nukleosid-Diphosphat-Kinasen liegen als Homohexamere vor, während bakterielle Nukleosid-Diphosphat-Kinasen Homotetramere bilden.

Nukleosid-Diphosphat-Kinasen spielen eine entscheidende Rolle in vielen Bereichen: (1) Die Enzyme können ATP als Donor verwenden, um die für die Nukleinsäuresynthese benötigten nicht-adenylischen NTPs sowie mehrere wichtige metabolische Intermediate zu synthetisieren, darunter UDP-Glukose und einige CDP-Lipid-Derivate; (2) die Enzyme katalysieren Transphosphorylierungen zwischen im Krebs-Zyklus gebildetem GTP und ADP; (3) die Enzyme können GTP für die Proteinsynthese, G-Protein-Signalwege und die Tubulinpolymerisation bereitstellen. Darüber hinaus wurden Nukleosid-Diphosphat-Kinasen in der biologischen Regulation von Wachstum, Entwicklung, Apoptose und Differenzierung nachgewiesen. Zudem können die Enzyme als Metastasensuppressoren in Tumoren wirken, eine histidinabhängige Proteinkinase-Aktivität aufweisen sowie eine 3’-5’-Exonuklease-Aktivität besitzen. Weiterhin fördern Nukleosid-Diphosphat-Kinasen auch die Tumorentstehung und übernehmen multiple Funktionen in der normalen Entwicklung und der zellulären Proliferation. Daher stoßen Nukleosid-Diphosphat-Kinasen aufgrund ihrer vielfältigen und bedeutenden Funktionen auf ein stetig wachsendes Interesse.

Creative Enzymes ist in der Lage, den präzisesten enzymatischen Assay für Nukleosid-Diphosphat-Kinasen durchzuführen. Die Aktivität der Nukleosid-Diphosphat-Kinasen wird spektrophotometrisch mittels eines gekoppelten Assays bestimmt. Die ATP-Bildung durch die Kinase-Reaktion wird mit der Reduktion von NADP⁺ gekoppelt (alternativ wird die ADP-Bildung mit der Oxidation von NADH gekoppelt), und der Reaktionsverlauf wird durch Überwachung der Änderung der Absorption bei 340 nm verfolgt. Die Qualität unserer Ergebnisse wird professionell und termingerecht sichergestellt – gestützt durch modernste spektrophotometrische Instrumentierung, führende Methoden und ein exzellentes Expertenteam. Creative Enzymes ist damit Ihre optimale Wahl für jedes Forschungsvorhaben im Zusammenhang mit Nukleosid-Diphosphat-Kinasen.

Abbildung: Die Kristallstruktur der Nukleosid-Diphosphat-Kinase aus Dictyostelium discoideum.
PDB: 1PAE