Messung der Enzymaktivität der RNA-abhängigen DNA-Polymerase

Creative Enzymes ist bestrebt, Enzymaktivitätsassays für RNA-gerichtete DNA-Polymerasen bereitzustellen. Wir verfolgen das Ziel, uns als der zuverlässigste Anbieter von Enzymanalytik-Services auf dem globalen Markt zu positionieren. Heute genießt Creative Enzymes den Ruf eines führenden Unternehmens im Bereich enzymatischer Assays und ist dafür bekannt, eine hohe Kundenzufriedenheit zu gewährleisten. Unser schneller Service, exzellente Kundenbetreuung und engagierte, lösungsorientierte Vorgehensweisen haben uns zum bevorzugten Anbieter gemacht.

RNA-gerichtete DNA-Polymerasen (EC 2.7.7.49; Reverse Transkriptasen; RTs) stammen überwiegend aus Retroviren, wie dem Avian-Myeloblastosis-Virus (AMV) oder dem Moloney-Murine-Leukemia-Virus (MMLV), die diese Enzyme nutzen, um aus ihren RNA-Matrizen komplementäre DNA (cDNA) zu synthetisieren – ein Prozess, der als Reverse Transkription bezeichnet wird. Allerdings nutzen auch Nicht-Retroviren RTs, beispielsweise das Hepatitis-B-Virus (HBV). AMV- und MMLV-RTs sind multifunktionale Enzyme, werden jedoch hauptsächlich als RNA-gerichtete DNA-Polymerasen eingesetzt. Konkret dienen Oligodesoxynukleotide – entweder Oligopolymere oder eine Sammlung kurzer, spezifischer oder zufälliger DNA-Sequenzen – als Primer für die Verlängerung auf RNA-Matrizen. Die aus der RNA-Matrize synthetisierte DNA wird als komplementäre DNA (cDNA) bezeichnet. Darüber hinaus besitzen RTs auch eine DNA-gerichtete DNA-Polymeraseaktivität (Abbildung 1), wobei die Inkorporation von dNTPs sehr langsam erfolgt, etwa 5 Nukleotide pro Sekunde. Zudem fehlt der DNA-Polymeraseaktivität der Reverse Transkriptase eine 3’→5’-Exonukleaseaktivität, was für bestimmte Anwendungen vorteilhaft sein kann. Ferner baut die dritte Aktivität der RTs die RNA in einem RNA:DNA-Hybrid ab (Abbildung 2). Funktionell ist die RNase-H-Aktivität ein wesentlicher Bestandteil des Lebenszyklus von Retroviren, kann jedoch auch selektiv Teile eines RNA-Moleküls zerstören, an die DNA-Moleküle hybridisiert wurden.

Abbildung 1: Reverse Transkriptase zeigt eine 5’→3’-DNA-Polymeraseaktivität (DNA-gerichtete DNA-Polymeraseaktivität).
Referenz: Tzertzinis G, Tabor S, Nichols N M. Current Protocols in Molecular Biology, 2008: 3.7. 1-3.7. 4.

Abbildung 2: Reverse Transkriptase zeigt zudem eine 5’→3’- und 3’→5’-Exoribonukleaseaktivität (RNase-H-Aktivität).
Referenz: Tzertzinis G, Tabor S, Nichols N M. Current Protocols in Molecular Biology, 2008: 3.7. 1-3.7. 4.

RTs spielen eine zentrale Rolle in der biologischen Analytik, der Arzneimittelentwicklung und der antiviralen Therapie. Beispielsweise werden RTs in der Forschung häufig eingesetzt, um die Polymerase-Kettenreaktion auf RNA anzuwenden – in einer Methode, die als Reverse-Transkriptions-Polymerase-Kettenreaktion (RT-PCR) bezeichnet wird. Darüber hinaus sind HIV-1-RTs die wichtigsten Zielstrukturen der antiviralen Therapie. Zudem wurde berichtet, dass RTs auch im Zusammenhang mit Krebstherapeutika stehen.

Damit verdeutlichen die oben genannten Funktionen die Unverzichtbarkeit und Bedeutung von RT-Aktivitätsassays als Instrumente zur Quantifizierung und Charakterisierung verschiedener Retroviren. Creative Enzymes ist vollumfänglich qualifiziert, die zuverlässigsten Aktivitätsassays für RTs bereitzustellen. Der kolorimetrische RT-Assay ist für den Einsatz in Forschungsstudien konzipiert und dient der quantitativen Bestimmung der RT-Aktivität in Zellkulturen und anderen biologischen Proben. Der Assay hat sich als geeignet erwiesen, um die RT-Aktivität einer Vielzahl von Retroviren zu bestimmen, darunter HIV-1, HIV-2, AMV und MMLV. Creative Enzymes freut sich darauf, die Details Ihres Bedarfs an RT-Aktivitätsassays zu erfahren, und stellt die ordnungsgemäße Durchführung der Prüfungen sicher.

Abbildung 3: Die Kristallstruktur der RT des humanen Immundefizienzvirus Typ 1.
PDB: 1HMV