Enzymatische Aktivitätsmessung von DNA-Nucleotidylexotransferase

Creative Enzymes genießt einen guten Ruf in der Enzymtestindustrie. Wir haben uns seit Jahren auf die Testung von Transferasen konzentriert. Basierend auf den standardisierten Protokollen und geschickten Operationen sind die Testergebnisse von hoher Genauigkeit und Reproduzierbarkeit. Creative Enzymes ist das einzige Unternehmen, das schnelle und präzise Aktivitätsassays für DNA-Nucleotidylexotransferase anbietet.

DNA-Nucleotidylexotransferase (TDT, EC 2.7.7.31) wurde 1960 erstmals aus dem Kalbthymus isoliert. Sie ist einzigartig, da sie die einzige bekannte DNA-Polymerase ist, die DNA-Stränge auf eine template-unabhängige Weise verlängert. In zellfreien Lösungen katalysiert sie die Verlängerung von Oligodeoxynukleotiden (Primern) durch zufällige Auswahl von 3’-Deoxyribonukleosid-5’-triphosphaten (dNTPs), die im Inkubationsmedium vorhanden sind. Mg2+ ist für die katalytische Aktivität unerlässlich. TDT kann in vitro Kombinationen nicht nur für Ribonukleotide und Deoxyribonukleotide, sondern auch für eine große Anzahl von unnatürlichen Nukleosidtriphosphaten erreichen.

Bis jetzt wurden viele Berichte über TDT hinsichtlich seiner Strukturen, Funktionen und genetischen Analysen veröffentlicht. Es wird angenommen, dass das Auftreten von TDT mit dem Aufkommen eines adaptiven Immunsystems zusammenfällt. Bei normalen Tieren deutet die strikte Begrenzung auf primitive lymphoide Zellen auf eine Rolle bei der Generierung der funktionalen Eigenschaften von T-Zellen und B-Zellen hin. Daher ist eine detaillierte Untersuchung des molekularen Mechanismus der TDT-Aktion sowie von Inhibitoren dieses Enzyms sowohl für die grundlegende Molekularbiologie als auch für potenzielle klinische Anwendungen von Interesse. Kürzlich wurden einige Anwendungen für dieses Enzym in der Analyse, Biotechnologie und medizinischen Forschung entwickelt. Zum Beispiel wird TDT zur Färbung von apoptotischen Zellen von Leukämiezelllinien verwendet. Mit der zunehmenden Anzahl von Studien, die auf TDT abzielen, gibt es eine bemerkenswert wachsende Anzahl von Anfragen zur Testung der Enzymaktivität. Aufgrund der Unbeständigkeit seiner Eigenschaften und Funktionen bedarf die Quantifizierung dieses Enzyms weiterer Untersuchungen. Creative Enzymes verfügt über leistungsstarke Plattformen, die geeignete Aktivitätstests unter verschiedenen Bedingungen anbieten können.

Abbildung: Die Kristallstruktur von TDT im Komplex mit einem DSB-Substrat und einem C-G-Basenpaar von der Maus.
Referenz: Gouge, J. et al. Embo J. 2015 34: 1126-1142.

Creative Enzymes ist ein Pionier in der Testung der Aktivität von DNA-Nucleotidylexotransferase. Das umfassende Wissen und die effizienten Abläufe garantieren präzise Ergebnisse. Creative Enzymes wird immer eine professionelle Haltung bei jedem Assay bewahren.