Messung der Enzymaktivität der DNA-Nukleotidylexotransferase

Creative Enzymes genießt in der Enzymtestbranche einen ausgezeichneten Ruf. Seit Jahren konzentrieren wir uns auf die Prüfung von Transferasen. Auf Basis standardisierter Protokolle und fachkundiger Durchführung sind die Prüfergebnisse von hoher Genauigkeit und Reproduzierbarkeit. Creative Enzymes ist das einzige Unternehmen, das schnelle und präzise Aktivitätsassays für die DNA‑Nukleotidylexotransferase anbietet.

Die DNA‑Nukleotidylexotransferase (TDT, EC 2.7.7.31) wurde 1960 erstmals aus Kalbsthymus isoliert. Sie ist einzigartig, da sie die einzige bekannte DNA‑Polymerase ist, die DNA‑Stränge template‑unabhängig verlängert. In zellfreien Lösungen katalysiert sie die Verlängerung von Oligodesoxynukleotiden (Primer) durch zufällige Auswahl der im Inkubationsmedium vorhandenen 3′‑Desoxyribonukleosid‑5′‑Triphosphate (dNTPs). Mg2+ ist für die katalytische Aktivität essenziell. TDT kann in vitro nicht nur Ribonukleotide und Desoxyribonukleotide, sondern auch eine große Anzahl unnatürlicher Nukleosidtriphosphate einbauen.

Bis heute wurden zahlreiche Publikationen zu TDT hinsichtlich Struktur, Funktion und genetischer Analysen veröffentlicht. Es wird angenommen, dass das Auftreten von TDT mit der Entstehung eines adaptiven Immunsystems zusammenfällt. Bei gesunden Tieren deutet die strikte Beschränkung auf primitive lymphoide Zellen auf eine Rolle bei der Generierung funktioneller Eigenschaften von T‑Zellen und B‑Zellen hin. Daher sind eine detaillierte Untersuchung des molekularen Wirkmechanismus von TDT sowie die Erforschung von Inhibitoren dieses Enzyms sowohl für die Grundlagenforschung der Molekularbiologie als auch für potenzielle klinische Anwendungen von Interesse. In jüngerer Zeit wurden Anwendungen dieses Enzyms in Analytik, Biotechnologie und medizinischer Forschung entwickelt. Beispielsweise wird TDT zur Färbung apoptotischer Zellen in Leukämie‑Zelllinien eingesetzt. Mit der zunehmenden Zahl an Studien mit Fokus auf TDT steigt auch die Anzahl der Anfragen zur Prüfung der Enzymaktivität deutlich. Aufgrund der Variabilität seiner Eigenschaften und Funktionen bedarf die Quantifizierung dieses Enzyms weiterer Untersuchungen. Creative Enzymes verfügt über leistungsfähige Plattformen, die eine geeignete Aktivitätsprüfung unter unterschiedlichen Bedingungen ermöglichen.

Abbildung: Die Kristallstruktur von TDT im Komplex mit einem DSB‑Substrat und einem C‑G‑Basenpaar aus der Maus.
Referenz: Gouge, J. et al. Embo J. 2015 34: 1126–1142.

Creative Enzymes ist ein Vorreiter in der Aktivitätsprüfung der DNA‑Nukleotidylexotransferase. Umfassendes Fachwissen und effiziente Abläufe gewährleisten präzise Ergebnisse. Creative Enzymes wahrt bei jedem Assay stets höchste Professionalität.