Messung der Enzymaktivität der dTMP-Kinase

Creative Enzymes verfügt seit jeher über eine starke Präsenz im Bereich der Aktivitätsmessung von Transferasen. Wir sind in der Lage, schnelle und präzise Assays für dTMP-Kinase durchzuführen. Mit modernsten Instrumenten arbeiten unsere Enzymologen daran, Aktivitätsergebnisse mit hoher Reproduzierbarkeit bereitzustellen.

dTMP-Kinase (TMPK, EC 2.7.4.9) katalysiert die Phosphorylierung von dTMP zu dTDP, einem essenziellen Schritt in der Biosynthese des Nukleotids dTTP. Dieses Enzym ist magnesiumabhängig und bevorzugt ATP als Phosphatdonor. dTMP-Kinase kommt in allen Organismen vor, die eine de novo-Pyrimidinsynthese benötigen. Die zelluläre Produktion von dTTP ist ein streng regulierter Prozess, der im Zellzyklus mit der DNA-Replikation koordiniert ist. Daher spielt dieses Enzym eine zentrale Rolle bei der Kontrolle der dTTP-Poolgröße in eukaryotischen Zellen. Neben seiner lebenswichtigen Funktion bei der Bereitstellung von Vorstufen für die DNA-Synthese besitzt die humane TMPK eine erhebliche medizinische Relevanz, da sie an der Aktivierung zahlreicher Prodrugs beteiligt ist, darunter Arzneimittel zur Behandlung von HIV- und Herpes-simplex-Virus-Infektionen. Aufgrund der geringen Sequenzähnlichkeit mit dem humanen Enzym ist TMPK aus Mycobacterium tuberculosis zudem zu einem potenziellen Target für die Entwicklung neuer Anti-Tuberkulose-Wirkstoffe geworden. Da sich inhibitorische Effekte in der enzymatischen Aktivität widerspiegeln, ist eine geeignete Assay-Methode für dTMP-Kinase ein wesentlicher Bestandteil enzymologischer Studien. Es wurden mehrere Assay-Methoden zur Aktivitätsmessung dieses Enzyms entwickelt. Um jedoch noch präzisere Ergebnisse zu ermöglichen, setzt Creative Enzymes auf maßgeschneiderte spektrophotometrische Methoden, bei denen die ADP-Bildung an die Oxidation von NADH in Reaktionen gekoppelt wird, die jeweils durch Pyruvatkinase bzw. Laktatdehydrogenase katalysiert werden.

Abbildung: Die Kristallstruktur der humanen dTMP-Kinase im Komplex mit Thymidinmonophosphat, Adenosindiphosphat und einem Magnesiumion.
Referenz: Ostermann N et al. Structure. 2000 8(6): 629-642.

Creative Enzymes ist ein Vorreiter in der Prüfung der dTMP-Kinase-Aktivität. Unsere herausragende Kompetenz in der Enzymaktivitätsmessung wurde von zahlreichen Kunden bestätigt und macht uns zur ersten Wahl für immer mehr Forschende. Auch künftig verpflichtet sich Creative Enzymes, den professionellen Standard und effiziente Services aufrechtzuerhalten, um Ihnen weiterhin als verlässlicher Partner zur Seite zu stehen.