Messung der Enzymaktivität der Phosphorylase-Kinase

Mit der Akkumulation umfangreicher Erfahrungen sowie experimenteller Kompetenzen in den vergangenen Jahren hat sich Creative Enzymes rasch zu einem der professionellsten Anbieter von Enzym-Services entwickelt. Gestützt auf fundierte fachliche Expertise und modernste Instrumentierung ist unser Wissenschaftlerteam in der Lage, sämtliche Enzymtests durchzuführen. Die Phosphorylase-Kinase-Assays basieren auf einer zuverlässigen spektrophotometrischen Methode.

Die Phosphorylase-Kinase (PHK) ist die erste entdeckte Proteinkinase. Dieses Enzym katalysiert spezifisch die Phosphorylierung eines einzelnen Serinrests und wandelt dadurch die inaktive Phosphorylase b (GPb) in die aktive Glykogenphosphorylase a (GPa) um. Für ihre Aktivität benötigt PHK Ca²⁺ und Calmodulin.

Die Phosphorylase-Kinase (PHK) ist ein Schlüsselenzym bei der Regulation des Glykogenabbaus. Das Enzym integriert extrazelluläre Signale, indem es Signale aus Hormonrezeptor-Interaktionen oder aus neuronalen Impulsen, die über Calcium vermittelt werden, mit Signalen aus intrazellulären Ereignissen kombiniert. Auf diese Weise wird eine streng kontrollierte Kinaseaktivität bereitgestellt, die die Glykogenphosphorylase reguliert. Strukturstudien haben gezeigt, dass das Enzym aus vier Subunit-Typen mit der Stöchiometrie (αβγδ)4 besteht. Die α- und β-Subunits sind regulatorisch und Zielstrukturen der Kontrolle durch Phosphorylierung. Die γ-Subunit ist die katalytische Subunit, und die δ-Subunit ist im Wesentlichen identisch mit Calmodulin und vermittelt die Calciumsensitivität. Ein PHK-Mangel weist deutliche klinische Manifestationen auf, wie z. B. verlangsamte körperliche Entwicklung im Kindesalter und eine ungewöhnliche Vergrößerung der Leber. Die Erkrankung kann durch eine abnorme Reduktion der katalytischen Aktivität charakterisiert werden. Daraus ergibt sich, dass eine sachgerechte Prüfung der Enzymaktivität zur Diagnosestellung beitragen kann. Zur Unterstützung solcher Vorhaben bietet Creative Enzymes zielgerichtete Methoden zur Abdeckung unterschiedlicher Forschungsanforderungen an.

Abbildung: Die Kristallstruktur der Phosphorylase-Kinase aus Oryctolagus cuniculus.
Referenz: Skamnaki VT et al. Biochemistry. 1999 38(44): 14718-14730.

Creative Enzymes gehört zu den wenigen Unternehmen, die präzise Assays für die Phosphorylase-Kinase anbieten. Die exakte Prüfmethode liefert zuverlässigere Ergebnisse als universelle Kits zur Bestimmung der Kinaseaktivität. Die Kapazität und Flexibilität der Aktivitätsassays von Creative Enzymes haben viele Kunden überzeugt. Mit dem Ziel einer maximalen Leistungsfähigkeit bei der Aktivitätsmessung wird Creative Enzymes kontinuierlich dazulernen und sich weiterentwickeln.