Messung der Enzymaktivität der Uronat-Dehydrogenase mittels spektrophotometrischer Assays

Creative Enzymes ist ein führendes Unternehmen in der Bereitstellung von Aktivitätsassay-Services für Oxidoreduktasen. Unsere über zehnjährige Erfahrung basiert auf der fundierten Entwicklung und Validierung von Assay-Methoden sowie auf umfassenden Erkenntnissen aus einer großen Anzahl erfolgreich abgeschlossener Prüfungen. Wir verfügen über ein Mess- und Qualitätskontrollsystem nach hohen Standards, das die höchstmögliche Zuverlässigkeit der Ergebnisse für Uronat-Dehydrogenase gewährleistet.

Bislang wurden Uronat-Dehydrogenasen (EC 1.1.1.203) ausschließlich in Agrobacterium und Pseudomonas nachgewiesen. Dieses Enzym gehört zur Familie der Oxidoreduktasen und katalysiert die Oxidation von D‑Galacturonsäure zu D‑Galactaro‑1,5‑Lacton bzw. von D‑Glucuronsäure zu D‑Glucaro‑1,5‑Lacton, begleitet von der Umwandlung von NAD⁺ zu NADH. Weitere gebräuchliche Bezeichnungen sind Uronat:NAD‑Oxidoreduktase und Uronsäure‑Dehydrogenase.

D‑Galacturonsäure ist der Hauptbestandteil von Pektin, einem wichtigen Rohstoff für biotechnologische Anwendungen, insbesondere mit Potenzial für Biokonversionen zu Kraftstoffen und Feinchemikalien. An der Katabolisierung von D‑Galacturonsäure sind zwei unterschiedliche Abbauwege beteiligt; einer davon ist ein oxidativer Stoffwechselweg. In diesem Weg wird D‑Galacturonsäure zunächst zu meso‑Galactarsäure oxidiert und anschließend in einem weiteren Schritt zu α‑Ketoglutarat umgesetzt. Uronat-Dehydrogenase (EC 1.1.1.203) ist das Schlüsselenzym im oxidativen Abbauweg der D‑Galacturonsäure-Katabolisierung in Bakterien. Bis heute wurde nur die Uronat-Dehydrogenase aus Agrobacterium tumefaciens (AtUdh) detailliert untersucht. AtUdh gehört zur Superfamilie der Short‑Chain Dehydrogenases/Reductases (SDR) und akzeptiert sowohl D‑Galacturonsäure als auch D‑Glucuronsäure als Substrate mit vergleichbaren Affinitäten. Weitere Studien zeigten, dass die katalytische Aktivität Mg²⁺-Ionen erfordert. Weiterführende Forschung über die grundlegende Charakterisierung dieses Enzyms hinaus ist bislang sehr begrenzt. Zahlreiche mechanistische und strukturelle Grundlagen müssen verstanden werden, bevor das Enzym in Biokonversionsprozessen eingesetzt werden kann. Geeignete Aktivitätsassays sind der erste Schritt für experimentelle Untersuchungen von Uronat-Dehydrogenasen aus anderen Spezies. Creative Enzymes bietet spektrophotometrische Assay-Services an, um den Bedarf der Kunden an der Nutzung von Uronat-Dehydrogenase in Biotechnologieprodukten der nächsten Generation zu erfüllen.

Abbildung: Kristallstruktur der Uronat-Dehydrogenase aus Agrobacterium tumefaciens.
Referenz: Tarja Parkkinen et al. J. Biol. Chem. 2011 286: 27294-27300

Creative Enzymes gehört zu den wenigen Unternehmen, die Assay-Services für Uronat-Dehydrogenasen anbieten. Wir haben geeignete Assay-Methoden sowohl für gereinigte Enzyme als auch für Enzymextrakte etabliert. Unsere Ergebnisse sind durch robuste Quantifizierungsansätze und eine konsistente Reproduzierbarkeit abgesichert. Auch künftig wird Creative Enzymes Ihre Forschung schnell und effizient unterstützen.