Messung der Enzymaktivität der Hyaluronan-Synthase mittels chromatographischer Assays

Mit langjähriger Erfahrung in Forschung und Entwicklung hat sich Creative Enzymes als weltweit führender Anbieter von Enzymaktivitätsassays etabliert. Creative Enzymes wächst kontinuierlich weiter – getragen vom gleichen unternehmerischen und innovativen Geist, der die Natur in die Wissenschaft überführt. Als Enzymhersteller erfüllt Creative Enzymes stets die Anforderungen unserer Kunden, unterstützt die nächste Entwicklungsstufe und ist damit die erste Wahl für leistungsstarke, kundenorientierte Services. Als eine unserer Kernleistungen bieten wir die präzise Aktivitätsbestimmung der Hyaluronan-Synthase an.

Hyaluronan-Synthasen (EC 2.4.1.212; HASs) sind membrangebundene Glykosyltransferasen, die für die Biosynthese von Hyaluronan (HA) verantwortlich sind. Es handelt sich um bifunktionale Enzyme, die sowohl UDP-α-D-Glucuronsäure als auch UDP-α-N-Acetyl-D-Glucosamin an zwei unterschiedlichen aktiven Zentren binden und in Anwesenheit von Mg²⁺ oder Mn²⁺ abwechselnd die Bildung zweier unterschiedlicher glykosidischer Bindungen katalysieren. Bei Säugetieren wird HA durch drei homologe HAS-Enzyme gebildet: HAS1, HAS2 und HAS3. Diese Enzyme sind hochspezifisch für UDP-GlcNAc und UDP-GlcA; vergleichbare Enzyme wurden in einer Vielzahl von Organismen identifiziert.

HA ist ein Glykosaminoglykan-Polymer, das aus repetitiven Disaccharideinheiten aus N-Acetylglucosamin β(1,4) und Glucuronsäure β(1,3) besteht. Es bindet große Mengen Wasser und verleiht Geweben dadurch eine hohe Viskosität und Elastizität. HA spielt eine zentrale Rolle bei Befruchtung, Embryogenese, Entwicklung und Differenzierung. Darüber hinaus ist HA an einem breiten Spektrum zellulärer Funktionen und Verhaltensweisen beteiligt, darunter Zellmigration, Phagozytose und Proteoglykan-Assemblierung. Ferner ist HA von entscheidender Bedeutung für Gewebe-Remodelling, die normale Gewebehomöostase sowie für Erkrankungen wie osteoartikuläre Pathologien, entzündliche Erkrankungen und vaskuläre Krankheiten. Zusätzlich kann HA als Wirkstoffträger (Drug-Delivery-System), als kosmetischer Inhaltsstoff und als Analgetikum eingesetzt werden. Angesichts der vielfältigen Funktionen von HA sind HASs Schlüsselenzyme zahlreicher biologischer Prozesse, da sie direkt die HA-Biosynthese steuern.

Obwohl HASs enzymologisch charakterisiert wurden, liegen nur wenige Studien zu Struktur und Mechanismus vor. Einer der Gründe für die begrenzte mechanistische Datenlage ist das Fehlen eines praktikablen Aktivitätsassays. Creative Enzymes ist umfassend qualifiziert, präzise Aktivitätsassays für HASs bereitzustellen. Die HAS-Aktivität wird mittels Chromatographie unter Verwendung von UDP-[¹⁴C]GlcA überwacht. Die Inkorporation von UDP-[¹⁴C]GlcA in hochmolekulares HA wurde mittels absteigender Papierchromatographie quantifiziert.

Unser Forschungszentrum zeichnet sich durch modernste Ausstattung, eine langjährige Forschungstradition und ein außergewöhnliches Expertenteam aus – dies gewährleistet eine hohe Reproduzierbarkeit und Genauigkeit der Aktivitätsmessung. Wir liefern die Produkte in kürzester Zeit ab Bestelleingang. Auch künftig wird Creative Enzymes Ihr Geschäft mit unseren spezialisierten Dienstleistungen unterstützen.

Abbildung: Die Kristallstruktur der humanen Hyaluronan-Synthase 2.
UniProt: Q92819