Enzymatische Aktivitätsmessung für Thymidin-Phosphorylase mittels spektrophotometrischer Assays

Creative Enzymes ist ein biotechnologisches Unternehmen, das sich auf Enzymaktivitätsassays spezialisiert hat. Wir sind fest davon überzeugt, dass die Qualität unserer Dienstleistungen die grundlegende Voraussetzung für unseren Unternehmenserfolg und die Basis unserer hohen Kundenzufriedenheit ist. Die professionellen Techniken und hochwertigen Dienstleistungen von Creative Enzymes unterstützen globale Kunden in verschiedenen Aktivitätsassays für Transferasen, einschließlich Thymidinphosphorylase.

Thymidinphosphorylase (EC 2.4.2.4; TP) ist ein einzigartiges metabolisches Kontrollenzym, das die reversible Phosphorylierung von Thymidin, Deoxyuridin und deren Analoga zu den jeweiligen Basen und 2-Desoxyribose-1-phosphat katalysiert. Es katalysiert auch den Deoxyribosyltransfer von einem Deoxynukleosid zu einer anderen Base, um ein zweites Nukleosid zu bilden. Thymidinphosphorylase ist ein dimeres Enzym, das aus zwei identischen Untereinheiten besteht, deren Molekulargewicht bei Säugetieren etwa 55.000 Dalton beträgt. Die menschliche Thymidinphosphorylase teilt 39 % ihrer Sequenzidentität mit der Escherichia coli Thymidinphosphorylase, was zu einer signifikanten Sequenzhomologie führt.

Abbildung 1: Phosphorylierungsreaktion von Thymidin mit Thymidinphosphorylase.
Referenz: Hatano A, et al. Bioorganic & Medicinal Chemistry, 2008, 16(7):3866-70.

Der Mechanismus der Phosphorylierungsreaktion wird als nukleophiler Prozess betrachtet: Das ribosyl 1-anomerische Kohlenstoffatom unterliegt der Addition eines Phosphations an seiner α-Seite. Es wurde berichtet, dass die Kristallstruktur der Thymidinphosphorylase, die mit TPI (5-Chloro-6-[1-(2-iminopyrrolidinyl) methyl]uracil) HCl in einer aktiven Konformation komplexiert ist, weiter die Mechanismen durch diesen inhibierten Komplex bestätigt.

Thymidinphosphorylase ist identisch mit dem von Thrombozyten abgeleiteten endothelialen Zellwachstumsfaktor (PD-ECGF), und die enzymatische Aktivität der Thymidinphosphorylase ist für die Angiogenese erforderlich. Daher ist Thymidinphosphorylase ein gutes Ziel für die Entwicklung von Antitumor-Medikamenten. Die Charakterisierung des katalytischen Verhaltens der Thymidinphosphorylase ist von grundlegender Bedeutung und dient als erster Schritt zur Entwicklung neuer Antitumor-Agentien.

Nachdem in den letzten Jahren die Aktivitäten zahlreicher Enzyme getestet wurden, hat Creative Enzymes umfangreiche und professionelle Erfahrungen gesammelt, die schnelle und qualitativ hochwertige Assay-Dienstleistungen für Thymidinphosphorylase bieten können. Die enzymatische Aktivität der Thymidinphosphorylase kann spektrophotometrisch bei 25 °C bestimmt werden, indem kontinuierlich der Unterschied in der Absorption eines Nukleotids bei 290 nm gemessen wird. Voll ausgestattet mit den fortschrittlichsten spektrophotometrischen Instrumenten garantieren wir die Zuverlässigkeit unserer Tests.

Abbildung 2: Die Kristallstruktur der Thymidinphosphorylase von E.coli.
PDB: 4EAF