Messung der Enzymaktivität der Adeninphosphoribosyltransferase mittels chromatographischer Assays

Creative Enzymes ist seit Jahren in der Enzymindustrie tätig. In dieser Zeit haben wir umfassende Erfahrung aufgebaut und vielfältige experimentelle Kompetenzen erworben. Unsere ausgeprägte Expertise in der Enzymtestung gewährleistet robuste Methoden und präzise Ergebnisse. Auf Basis modernster Ausstattung bietet Creative Enzymes erstklassige Dienstleistungen zur Bestimmung der Adenin-Phosphoribosyltransferase mittels chromatographischer Assays.

Die Adenin-Phosphoribosyltransferase (APRT) ist ein Mitglied der Familie der Phosphoribosyltransferasen (PRT). Die Funktion des Enzyms besteht im Recycling der Purinbase Adenin, indem es die Mg2+-abhängige Umwandlung von Adenin und α-D-5-Phosphoribosyl-1-pyrophosphat (PRPP) zu Adenosinmonophosphat (AMP) und Pyrophosphat katalysiert.

Bei Säugetieren ist APRT in allen Geweben vorhanden und an der metabolischen Salvage von Adenin beteiligt, das aus dem Polyamin-Biosyntheseweg oder aus der Nahrung stammt. In Organismen, die Purine de novo synthetisieren können, ist das Purin-Recycling vor allem während Phasen schnellen Wachstums von Bedeutung, beispielsweise in rasch proliferierenden Tumorzellen. Obwohl APRT für den Menschen nicht essenziell ist, bleibt ein genetischer Defekt der Enzymaktivität nicht folgenlos. Beim Menschen sind derzeit zwei Formen der APRT-Defizienz bekannt, die beide auf Mutationen im entsprechenden Gen beruhen. Die Typ-I-Defizienz resultiert aus einem vollständigen Verlust der APRT-Aktivität, während die Typ-II-Defizienz zu einer zehnfach verminderten Affinität zum Substrat führt. Zu den wichtigsten klinischen Manifestationen der APRT-Defizienz zählen Nierensteine, Kristallurie, Hämaturie, Dysurie sowie Infektionen der Harnwege. Solche klinischen Verläufe können zu schwerem Nierenversagen führen. Daher hat sich APRT zu einem sinnvollen Ziel für chemotherapeutische Interventionen entwickelt. Angesichts der hohen klinischen Relevanz nimmt die Zahl der Studien zu diesem Enzym kontinuierlich zu. In der Vergangenheit wurde die Aktivitätsmessung jedoch aufgrund fehlender geeigneter Methoden und präziser Detektionsinstrumente nur selten durchgeführt. Mit der Weiterentwicklung analytischer Techniken und der Etablierung standardisierter Verfahren wurden erhebliche Fortschritte erzielt. Creative Enzymes verfolgt die aktuellen Entwicklungen eng und erweitert kontinuierlich seine Kompetenzen, um erstklassige Dienstleistungen für APRT bereitzustellen.

Abbildung: Die Kristallstruktur der humanen Adenin-Phosphoribosyltransferase im Komplex mit PRPP, ADE und R5P.

Creative Enzymes setzt sich mit höchstem Engagement für die Erforschung und Weiterentwicklung enzymologischer Dienstleistungen ein. Unsere spezifischen Kompetenzen in der Aktivitätsprüfung wurden von zahlreichen Kunden bestätigt. Für die Quantifizierung der Enzymaktivität ist Creative Enzymes stets Ihr zuverlässiger Partner.