Messung der Enzymaktivität der Purin-Nukleosid-Phosphorylase mittels spektrophotometrischer Assays

Creative Enzymes ist ein führendes Unternehmen für hochwertige bioanalytische Dienstleistungen. Wir bieten kundenspezifische Auftragsforschung mit Schwerpunkt auf Enzymaktivitätsanalysen und bedienen die Anforderungen unserer Kunden weltweit. Vollständig ausgestattet mit modernsten spektrophotometrischen Instrumenten werden alle Assays professionell und fristgerecht durchgeführt. Im Folgenden bieten wir Ihnen einen zuverlässigen Aktivitätsassay für die Purin-Nukleosid-Phosphorylase an.

Die Purin-Nukleosid-Phosphorylase (EC 2.4.2.1; PNPase) ist ein Enzym, das die reversible Umwandlung von Purin-Nukleosiden (Inosin und Guanosin) und Desoxynukleosiden (Desoxyinosin und Desoxyguanosin) in die jeweiligen Purinbasen sowie in Pentose-1-phosphat katalysiert. Die Purin-Nukleosid-Phosphorylase ist ein ubiquitäres Enzym, das eine zentrale Rolle im Salvage-Stoffwechselweg spielt und für die korrekte Synthese und den Abbau von DNA in lebenden Zellen erforderlich ist.

Purin-Nukleosid-Phosphorylasen lassen sich weiter in zwei Klassen einteilen: trimerische und hexamerische. Trimerische Purin-Nukleosid-Phosphorylasen, auch als Säuger-Purin-Nukleosid-Phosphorylase bezeichnet, sind spezifisch für 6-Oxopurin-Nukleoside und kommen sowohl in höheren Organismen als auch in Prokaryoten vor. Hexamerische Purin-Nukleosid-Phosphorylasen finden sich ausschließlich in niederen Organismen und weisen eine breitere Substratspezifität auf, da sie sowohl 6-Amino- als auch 6-Oxopurin-Nukleoside akzeptieren. Obwohl die aktiven Zentrumreste trimerischer und hexamerischer Purin-Nukleosid-Phosphorylasen erhebliche Unterschiede aufweisen, gelten die Mechanismen als ähnlich. Die Unterschiede in der Substratspezifität zwischen hexamerischen und trimerischen Purin-Nukleosid-Phosphorylasen legen eine Strategie für die suizidgenbasierte Krebstherapie nahe. Daher gewinnen Purin-Nukleosid-Phosphorylasen zunehmend an Bedeutung für den Einsatz in der Krebstherapie. Darüber hinaus führt ein Mangel an Aktivität der trimerischen Purin-Nukleosid-Phosphorylase beim Menschen zu einer selektiven Immundefizienz infolge einer fehlerhaften T‑Zell-Proliferation. Die Entwicklung neuer selektiver immunsuppressiver Arzneimittel und antineoplastischer Wirkstoffe würde daher von der Identifizierung von Enzyminhibitoren profitieren.

Um die funktionelle Bedeutung von Purin-Nukleosid-Phosphorylasen zu untersuchen, ist es von wesentlicher Bedeutung, deren Aktivität zuverlässig überwachen zu können. Zu diesem Zweck stellt Creative Enzymes einen präzisen Aktivitätsassay für Purin-Nukleosid-Phosphorylasen bereit, basierend auf umfassender Erfahrung in der Charakterisierung der Enzyme und der Optimierung der Methode. Die Aktivität dieses Enzyms wird bei 293 nm bestimmt, indem die Freisetzung von Harnsäure spektrophotometrisch gemessen wird.

Mit jahrelanger Forschung und Entwicklung hat sich Creative Enzymes als weltweit führender Anbieter von Dienstleistungen zur Messung der Enzymaktivität etabliert. Unabhängig von den Herausforderungen auf Ihrem Weg zu Enzymanwendungen erfüllt Creative Enzymes stets die Anforderungen der nächsten Projektphase und ist Ihr bevorzugter Dienstleistungspartner.

Abbildung: Die Kristallstruktur des E. coli-Purin-Nukleosid-Phosphorylase-Hexamers.
Referenz: Bennett E M, et al. Journal of Biological Chemistry, 2003, 278(47): 47110-47118.