Enzymaktivitätsmessung für Nucleosid-Deoxyribosyltransferase unter Verwendung chromatographischer Assays

Creative Enzymes ist das erfahrenste Biotech-Unternehmen, das sich auf Enzymassays spezialisiert hat. Ausgestattet mit den neuesten Instrumenten, den aktuellsten Technologien und einem herausragenden Expertenteam ist Creative Enzymes bestens vorbereitet, um den zuverlässigen Assay für Transferasenenzyme, einschließlich Nukleosid-Deoxyribosyltransferasen, anzubieten.

Nukleosid-Deoxyribosyltransferasen (EC 2.4.2.6) katalysieren den Austausch zwischen der Purin- oder Pyrimidinbase von 2’-Deoxyribonukleosiden und freien Pyrimidin- oder Purinbasen. Diese Enzyme bieten eine Alternative zu den Nukleosid-Phosphorylasen, die denselben Prozess katalysieren. Diese Enzyme sind spezifisch für 2’-Deoxyribonukleoside, hoch regioselektiv sowie stereoselektiv, sodass ausschließlich β-Anomere gebildet werden. Nukleosid-Deoxyribosyltransferasen wurden ursprünglich für Lactobacillen beschrieben und wurden auch in bestimmten Arten von Streptococcus und in parasitären einzelligen eukaryotischen Organismen wie Crithidia luciliae, Trypanosoma brucei und Borrelia burgdorferi gefunden.

Abbildung 1: Die Reaktion, die von Nukleosid-Deoxyribosyltransferasen katalysiert wird. E, Enzym; B1 und B2, Purin oder Pyrimidin.
Referenz: Fernándezlucas J, et al. Applied & Environmental Microbiology, 2010, 76(5):1462-70.

Zwei Typen von Nukleosid-Deoxyribosyltransferasen wurden in Lactobacillen beschrieben: Typ I ist Purin-Deoxyribosyltransferase, spezifisch für den Transfer von 2’-Deoxyribose zwischen zwei Purinen; Typ II ist Nukleosid-2’-Deoxyribosyltransferase, die den Transfer von Deoxyribose zwischen entweder Purinen oder Pyrimidinen katalysiert. Beide Enzyme folgen einem Ping-Pong-Bi-Bi-Mechanismus durch die Bildung eines kovalenten Deoxyriboxyl-Enzym-Intermediats. Daher können diese Enzyme verwendet werden, um eine „One-Pot“-Synthese von 2’-Deoxyribosyl-Nukleosiden durchzuführen. Diese Biotransformation ist ein vielversprechender Prozess, da die Reaktionen unter sehr milden Bedingungen stattfinden und umweltfreundliche chemische Technologien bieten.

Der chromatographische Assay hat sich als die zuverlässigste Methode zur Messung der Aktivität von Nukleosid-Deoxyribosyltransferasen erwiesen. Creative Enzymes präsentiert die fortschrittlichsten chromatographischen Techniken, um die enzymatische Aktivität genau zu messen. Beispielsweise wird die Produktion von Deoxyadenosin mittels Hochleistungsflüssigkeitschromatographie bei einer Absorption von 254 nm analysiert, oder das gebildete Deoxycytidin wird durch umgekehrte Phasen-Hochleistungsflüssigkeitschromatographie getrennt und bei einer Absorption von 260 nm gemessen. Creative Enzymes verspricht, die Produkte in der kürzest möglichen Zeit ab dem Datum der Auftragserteilung zu liefern. Der schnelle Service, die beste Kundenbetreuung und die engagierten Ressourcen haben Creative Enzymes zum bevorzugten Lieferanten für alle Kunden gemacht.

Abbildung 2: Die Kristallstruktur der Nukleosid-Deoxyribosyltransferase von Lactobacillus leichmannii.
PDB: 1F8X