Messung der Enzymaktivität der Nukleosid-Desoxyribosyltransferase mittels chromatographischer Assays

Creative Enzymes ist das erfahrenste Biotechnologieunternehmen mit Spezialisierung auf Enzymassays. Ausgestattet mit modernster Instrumentierung, aktuellen Technologien und einem herausragenden Expertenteam ist Creative Enzymes bestens aufgestellt, um zuverlässige Assays für Transferase-Enzyme anzubieten, einschließlich Nukleosid-2’-Desoxyribosyltransferase.

Nukleosid-2’-Desoxyribosyltransferasen (EC 2.4.2.6) katalysieren den Austausch zwischen der Purin- oder Pyrimidinbase von 2’-Desoxyribonukleosiden und freien Pyrimidin- bzw. Purinbasen. Diese Enzyme stellen eine Alternative zu Nukleosidphosphorylasen dar, die denselben Prozess katalysieren. Sie sind spezifisch für 2’-Desoxyribonukleoside, hoch regioselektiv sowie stereoselektiv, sodass ausschließlich β-Anomere gebildet werden. Nukleosid-2’-Desoxyribosyltransferasen wurden zunächst bei Laktobazillen beschrieben und anschließend auch in bestimmten Streptococcus-Arten sowie in parasitischen einzelligen eukaryotischen Organismen wie Crithidia luciliae, Trypanosoma brucei und Borrelia burgdorferi nachgewiesen.

Abbildung 1: Die durch Nukleosid-2’-Desoxyribosyltransferasen katalysierte Reaktion. E, Enzym; B1 und B2, Purin oder Pyrimidin.
Referenz: Fernándezlucas J, et al. Applied & Environmental Microbiology, 2010, 76(5):1462-70.

Bei Laktobazillen wurden zwei Typen von Nukleosid-2’-Desoxyribosyltransferasen beschrieben: Typ I ist die Purin-Desoxyribosyltransferase, spezifisch für die Übertragung von 2’-Desoxyribose zwischen zwei Purinen; Typ II ist die Nukleosid-2’-Desoxyribosyltransferase, die die Übertragung von Desoxyribose zwischen Purinen oder Pyrimidinen katalysiert. Beide Enzyme folgen einem Ping-Pong-Bi-Bi-Mechanismus unter Bildung eines kovalenten Desoxyribosyl-Enzym-Zwischenprodukts. Daher können diese Enzyme für eine „One-Pot“-Synthese von 2’-Desoxyribosylnukleosiden eingesetzt werden. Diese Biotransformation ist ein vielversprechender Prozess, da die Reaktionen unter sehr milden Bedingungen ablaufen und umweltverträgliche chemische Technologien ermöglichen.

Der chromatographische Assay hat sich als die zuverlässigste Methode zur Bestimmung der Aktivität von Nukleosid-2’-Desoxyribosyltransferasen erwiesen. Creative Enzymes bietet modernste chromatographische Verfahren zur präzisen Messung der Enzymaktivität an. So wird beispielsweise die Bildung von Desoxyadenosin mittels Hochleistungsflüssigkeitschromatographie (HPLC) bei einer Absorption von 254 nm analysiert, oder das gebildete Desoxycytidin wird mittels Umkehrphasen-Hochleistungsflüssigkeitschromatographie (RP-HPLC) getrennt und bei einer Absorption von 260 nm quantifiziert. Creative Enzymes garantiert die Lieferung der Produkte innerhalb kürzester Zeit nach Auftragserteilung. Der schnelle Service, exzellente Kundenbetreuung und dedizierte Ressourcen haben Creative Enzymes zum bevorzugten Anbieter für alle Kunden gemacht.

Abbildung 2: Die Kristallstruktur der Nukleosid-2’-Desoxyribosyltransferase aus Lactobacillus leichmannii.
PDB: 1F8X