Enzymaktivitätsmessung für Levansucrase

Creative Enzymes ist ein biotechnologisches Unternehmen, das sich auf Enzyme und deren Aktivitätsmessung spezialisiert hat. Wir arbeiten mit unseren vielfältigen und einzigartigen Kunden zusammen, um sie bei ihren Bedürfnissen zur Prozessoptimierung zu unterstützen. Die Fähigkeiten von Creative Enzymes sind umfangreich und decken alle Aspekte der Entdeckung, Entwicklung und Optimierung von Enzymassays ab. Creative Enzymes ist kompetent, den zuverlässigsten Aktivitätsassay für Levansucrase anzubieten.

Levansucrasen (EC 2.4.1.10) wurden in einer Reihe von gramnegativen Arten wie Pantoea agglomerans, Zymomonas mobilis, Gluconobacter oxydans und einem Isolat von Rhanella aquatilis sowie in grampositiven Bakterien wie Bacillus subtilis, Streptococcus mutans und Actinomyces viscosus identifiziert. Das Enzym katalysiert drei charakteristische Reaktionen: (i) die Synthese von Levan aus Saccharose durch Transfructosylierung unter Freisetzung von Glukose, (ii) die Hydrolyse von Levan zu Monosacchariden von Fruktose, (iii) den Austausch von [¹⁴C]Glukose in der Reaktion: Fruktose-2,1-Glukose + [¹⁴C]Glukose → Fruktose-2,1-[¹⁴C]Glukose + Glukose. Levansucrasen verbinden die Fructosyl-Einheiten durch die β(2,6)-Verknüpfung, während die verwandten Enzyme Inulosucrasen (EC 2.4.1.9) dies durch die β(2,1)-Verknüpfung tun. Je nach Verknüpfungsart werden die Fructan-Polymere entweder als Levan oder Inulin bezeichnet. Die Enzyme gehören zu den Glycosid-Hydrolasen (GH), wobei bakterielle Enzyme in Familie 68 und strukturell verwandte pflanzliche und pilzliche Enzyme in Familie 32 gruppiert sind. Ein interessantes Merkmal von Levansucrasen aus verschiedenen Bakterien ist ihre Spezifität bei der Bildung von entweder Fructooligosacchariden (FOS) oder hochmolekularen Polymeren. Im Allgemeinen produzieren Levansucrasen aus grampositiven Bakterien Polymere, während die aus gramnegativen Bakterien FOS produzieren.

Levansucrasen sind nützlich bei der Levanproduktion für Anwendungen in der Lebensmittel- und Pharmaindustrie. Zum Beispiel könnte Levan in der Pathogenese von Parodontalerkrankungen wichtig sein, da Levan ein wichtiger struktureller Polysaccharid in Plaque sein könnte und ein Reservoir für Kohlenhydrate für das Wachstum oraler Mikroben bietet. Außerdem könnte Levan immunologische Schäden auslösen, da gezeigt wurde, dass Levan aus anderen Organismen mitogen für menschliche B-Lymphozyten ist und das Komplementsystem über den alternativen Weg aktiviert. Darüber hinaus können Levansucrasen auch zur Herstellung des künstlichen Süßungsmittels und Laktosukrose verwendet werden. Daher ist es wichtig, die Aktivität dieses Enzyms überwachen zu können, um die funktionale Bedeutung von Levansucrasen erfolgreich zu untersuchen. Allerdings unterscheiden sich die bisher beschriebenen Levansucrasen erheblich in ihren Eigenschaften, z. B. Molekulargewicht, Donor-, Akzeptor- und Inhibitorspezifität, was ein Hindernis für die reibungslose Durchführung des Enzymassays im industriellen Maßstab darstellt. Glücklicherweise bietet Creative Enzymes den genauen Aktivitätsassay für Levansucrasen an, basierend auf jahrelanger Erfahrung in der Entdeckung von Enzymen und der Optimierung von Methoden.

Der spektrophotometrische Levansucrase-Assay basiert auf einem ultravioletten Glukose-Assay-Kit, das die Menge an Glukose misst, die während der Inkubation mit Saccharose freigesetzt wird. Die Menge an Glukose in der Probe ist proportional zur Menge an reduziertem NADPH, die erzeugt wird. Um dieses Assay-Kit in einen kontinuierlichen spektrophotometrischen Assay für Levansucrase umzuwandeln, wird Saccharose hinzugefügt und die Absorption bei 340 nm wird von einem Spektrophotometer aufgezeichnet. Ungeachtet der Herausforderungen wird Creative Enzymes immer die Anforderungen für die nächste Entwicklungsstufe erfüllen und wird Ihre beste Wahl mit zufriedenstellenden Dienstleistungen sein. Der höchste Qualitätsstandard für unsere Produkte ist einer der Säulen unseres globalen Erfolgs und die Grundlage unserer hohen Kundenzufriedenheit.

Abbildung: Die Kristallstruktur der Bacillus subtilis Levansucrase.
PDB: 1OYG