Enzymaktivitätsmessung für Alpha-D-Xylosid Xylohydrolase

Creative Enzymes bietet eine Vielzahl von Enzymassays an, insbesondere zur Messung der Enzymaktivität. Wir arbeiten eng mit unseren Kunden zusammen, um ihre Produktentwicklung und Prozessoptimierungsbedürfnisse zu unterstützen. Nachdem wir in den letzten Jahren die Aktivitäten einer breiten Palette von Enzymen getestet haben, hat Creative Enzymes umfangreiche Erfahrungen gesammelt, die schnelle und qualitativ hochwertige Aktivitätsassays für Hydrolasen wie alpha-D-xylosid xylohydrolase ermöglichen.

Alpha-D-xylosid xylohydrolase (EC 3.2.1.177; α-xylosidase) ist ein Enzym, das die Freisetzung von α-Xylose von der nicht reduzierenden terminalen Seite von α-xylosid katalysiert. Einige α-xylosidasen aus Mikroorganismen und Pflanzen wurden gereinigt und charakterisiert, aber ihre Aminosäuresequenzen wurden nie vollständig untersucht. Es gibt nur wenige Beispiele in enzymatischen Studien von α-xylosidase mit aufgeklärter Aminosäuresequenz. Unter diesen zeigt die α-xylosidase von Sulfolobus solfataricus eine optimale Aktivität bei 90 °C und eine hohe hydrolytische Aktivität auf α-xylosid wie Isoprimeverose, α-D-xylopyranosyl-(1,6)-D-glucopyranose sowie Oligosaccharide wie Maltose und Maltotriose. Die Kapuzinerkresse, Arabidopsis, und Kiefer α-xylosidasen, die als Glycosid-Hydrolase (GH) Familie 31 Enzyme etabliert sind, werden als an dem Metabolismus von Xyloglucan beteiligt angesehen. In Lactobacillus pentosus wurde gezeigt, dass xylQ, das α-xylosidase kodiert, für den Metabolismus von Isoprimeverose verantwortlich ist. Es ist jedoch wenig über die enzymatischen Eigenschaften der α-xylosidase bekannt.

Vertreter der α-xylosidasen aus GH-31 nutzen einen zweistufigen Mechanismus. Im ersten Schritt katalysiert das Enzym das Abgehen der Aglykon-Gruppe vom Substrat (Donor) und die anschließende Bildung eines glycosylester Zwischenprodukts. Im zweiten Schritt wird das Enzym durch ein Nucleophil, das das anomere Kohlenstoffatom des Donors angreift, deglycosyliert und spaltet das kovalente Zwischenprodukt, was zu einer insgesamt beibehaltenen anomeren Konfiguration des Substrats führt. Wenn ein anderes Nucleophil als Wasser das glycosylierte Enzymzwischenprodukt abfängt, tritt Transglycosylierung auf, die glycosylierte Produkte erzeugt.

Obwohl α-xylosidasen enzymologisch charakterisiert wurden, ist sehr wenig über ihre Strukturen und Mechanismen bekannt. Einer der Gründe für die begrenzte Menge an mechanistischen Informationen ist das Fehlen eines praktischen Aktivitätsassays. Creative Enzymes ist stolz darauf, die besten Assays zur enzymatischen Aktivität von α-xylosidasen anzubieten. Die Aktivitäten der α-xylosidasen werden durch die spektrophotometrische Messung der Freisetzung von Xylose bestimmt. Die Menge an freigesetzter Xylose in der Reaktionsmischung wird mit der p-Bromoanilin-Methode gemessen.

Mit den wichtigsten Ressourcen, den geschickten und erfahrenen Wissenschaftlern von Creative Enzymes, freuen wir uns, den fortschrittlichen Assay für Enzymaktivitäten anzubieten. Insgesamt ist unsere hochmoderne Technologie zur Messung der enzymatischen Aktivität eine ideale Wahl für alle Forschungs- und Entwicklungsaktivitäten, die α-xylosidasen betreffen.

Abbildung: Die Kristallstruktur der α-xylosidase von Escherichia coli.
PDB: 1WE5