Messung der Enzymaktivität der Alpha-D-Xylosid-Xylohydrolase

Creative Enzymes bietet ein breites Spektrum an Enzymassays an, insbesondere zur Bestimmung der Enzymaktivität. Wir arbeiten eng mit unseren Kunden zusammen, um deren Anforderungen in der Produktentwicklung und Prozessoptimierung zu unterstützen. Durch die Prüfung der Aktivitäten einer Vielzahl von Enzymen in den vergangenen Jahren hat Creative Enzymes umfangreiche Erfahrung aufgebaut, die schnelle und qualitativ hochwertige Aktivitätsassays für Hydrolasen wie die Alpha-D-xylosid-Xylohydrolase ermöglicht.

Alpha-D-xylosid-Xylohydrolase (EC 3.2.1.177; α-Xylosidase) ist ein Enzym, das die Abspaltung von α-Xylose vom nicht-reduzierenden terminalen Ende eines α-Xylosids katalysiert. Einige α-Xylosidasen aus Mikroorganismen und Pflanzen wurden gereinigt und charakterisiert, ihre Aminosäuresequenzen wurden jedoch nie vollständig untersucht. Es gibt nur wenige Beispiele enzymologischer Studien zu α-Xylosidasen, bei denen die Aminosäuresequenz aufgeklärt wurde. Unter diesen zeigt die α-Xylosidase aus Sulfolobus solfataricus eine optimale Aktivität bei 90 °C sowie eine hohe hydrolytische Aktivität gegenüber α-Xylosiden wie Isoprimeverose, α-D-Xylopyranosyl-(1,6)-D-Glucopyranose, sowie gegenüber Oligosacchariden wie Maltose und Maltotriose. Die α-Xylosidasen aus Kapuzinerkresse, Arabidopsis und Kiefer, die als Enzyme der Glycosid-Hydrolase-(GH)-Familie 31 etabliert sind, gelten als an dem Stoffwechsel von Xyloglucan beteiligt. In Lactobacillus pentosus wurde gezeigt, dass xylQ, das für eine α-Xylosidase kodiert, für den Stoffwechsel von Isoprimeverose verantwortlich ist. Über die enzymatischen Eigenschaften der α-Xylosidase ist jedoch nur wenig bekannt.

Repräsentative α-Xylosidasen aus der GH-31-Familie nutzen einen zweistufigen Mechanismus. Im ersten Schritt katalysiert das Enzym das Abgehen der Aglykon-Gruppe vom Substrat (Donor) und die anschließende Bildung eines Glycosylester-Intermediats. Im zweiten Schritt wird das Enzym durch einen Nukleophil de-glycosyliert, der das anomere Kohlenstoffatom des Donors angreift und das kovalente Intermediat spaltet, was insgesamt zur Retention der anomeren Konfiguration des Substrats führt. Wenn ein anderer Nukleophil als Wasser das Glycosyl-Enzym-Intermediat abfängt, kommt es zur Transglycosylierung, wodurch glycosylierte Produkte entstehen.

Obwohl α-Xylosidasen enzymologisch charakterisiert wurden, ist über ihre Strukturen und Mechanismen nur sehr wenig bekannt. Einer der Gründe für die begrenzte mechanistische Informationslage ist das Fehlen eines praktikablen Aktivitätsassays. Creative Enzymes ist stolz darauf, erstklassige Assays zur Bestimmung der enzymatischen Aktivität von α-Xylosidasen anzubieten. Die Aktivität von α-Xylosidasen wird durch die spektrophotometrische Messung der freigesetzten Xylose bestimmt. Die in der Reaktionsmischung freigesetzte Xylosemenge wird mittels der p-Bromanilin-Methode quantifiziert.

Mit den wichtigsten Ressourcen – den kompetenten und erfahrenen Wissenschaftlern von Creative Enzymes – stellen wir Ihnen gerne fortschrittliche Assays zur Bestimmung von Enzymaktivitäten zur Verfügung. Insgesamt ist unsere hochmoderne Technologie zur Messung der Enzymaktivität eine ideale Wahl für sämtliche Forschungs- und Entwicklungsaktivitäten, die α-Xylosidasen betreffen.

Abbildung: Kristallstruktur der α-Xylosidase aus Escherichia coli.
PDB: 1WE5